Robust Quantitative Analysis of EDDP by PaperSpray Mass Spectrometry

Význam tématu

Analýza metabolitů opioidu methadonu je klíčová v klinickém výzkumu i toxikologii. Metoda PaperSpray mass spectrometry nabízí rychlé a minimálně zásahové stanovení EDDP (2-ethylidene-1,5-dimethyl-3,3-diphenylpyrrolidin) přímo z biologických matric. Díky zjednodušené přípravě vzorku a vysoké průchodnosti je vhodná pro vysoce výkonné rutinní aplikace.

Cíle a přehled studie

Cílem studie bylo vyvinout robustní workflow pro kvantitativní stanovení EDDP v lidské krvi a moči s využitím systému Thermo Scientific VeriSpray a hmotnostních spektrometrů TSQ Fortis a TSQ Quantis. Studie se zaměřila na dosažení nízké mezní kvantifikace, vysoké reprodukovatelnosti během dlouhých sekvencí a minimalizaci údržby.

Použitá metodika a instrumentace

Vzorky krve a moči byly připraveny přídavkem standardů a interního standardu EDDP-d3, následovalo promíchání a nanesení objemu 8 µl (krev) nebo 5 µl (moč) na papírové proužky sample plate. Sušení proběhlo v sušárně při 45 °C (30 min krev, 5 min moč). Ionizace byla realizována postupným navlhčením a aplikací sprejových rozpouštědel.

Instrumentace

• Thermo Scientific TSQ Quantis MS s PaperSpray ion source pro krev
• Thermo Scientific TSQ Fortis MS s VeriSpray ion source pro moč
• VeriSpray Plate Loader a magazín pro bezobslužný provoz až 480 vzorků
• Termostatovaný ion transfer tube, čištění po 240 injekcích
• Software Thermo Scientific TraceFinder 4.1 pro kvantifikaci

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda pro obě matrice dosáhla lineárního rozsahu 3,5–500 ng/ml. Dolní mez kvantifikace (LLOQ) 3,5 ng/ml splnila požadavky přesnosti (<20 %) a roztřesení (<15 %). V sérii 480 vzorků byla zachována vysoká reprodukovatelnost (RSD 1,4–2,8 %) a přesnost ±15 %. Vícenásobné kalibrace během běhu prokázaly stabilitu signálu i bez nutnosti časté údržby.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda umožňuje rychlé stanovení EDDP bez extrakčních kroků, což šetří čas i spotřebu rozpouštědel. Vysoká průchodnost až 240 vzorků za běh a minimální požadavky na obsluhu jsou výhodou pro klinické laboratoře, toxikologické screeningy a farmakokinetické studie.

Budoucí trendy a možnosti využití

Další rozvoj může směřovat k rozšíření panelu sledovaných látk, automatizaci přípravy papírových desek a optimalizaci ionizačních podmínek pro zvýšení citlivosti. Integrace s on-line datovými platformami umožní rychlejší vyhodnocení výsledků.

Závěr

PaperSpray MS s využitím systému VeriSpray a hmotnostních spektrometrů TSQ Fortis/Quantis představuje efektivní a spolehlivou alternativu pro kvantitativní analýzu EDDP v krvi a moči. Metoda prokázala výbornou robustnost, nízkou mez kvantifikace a minimální požadavky na údržbu, což z ní činí perspektivní nástroj pro klinický výzkum i rutinní testování.

Reference

1. H. Wang et al, Angew. Chem. Int. Ed., 2010, 49(5), 877-880
2. N. E. Manicke et al., J. Am. Soc. Mass Spectrom., 2011, 22, 1501-1507
3. H. Evard et al., J. Food Compos. Anal., 2015, 41, 221-225
4. S. L. Reeber et al., Anal. Methods, 2015, 7, 9808-9816