Evaluation of Differentiated/Undifferentiated State of iPS Cells Using DPiMS™-2020 and eMSTAT Solution™

Význam tématu

Hodnocení diferenciovaného a nediferenciovaného stavu pluripotentních kmenových buněk je zásadní pro výzkum, vývoj a kontrolu kvality v regenerativní medicíně. Tradiční metody vyžadují složitou frakcionaci a předúpravu vzorků, což zpomaluje analýzu a spotřebovává cenné buněčné kultury.

Cíle a přehled studie

Článek představuje rychlou a jednoduchou analýzu složení kultivačního média iPS buněk pomocí Probe Electro Spray Ionization na hmotnostním spektrometru DPiMS-2020 a následné skupinové třídění dat ve statistickém softwaru eMSTAT Solution.

Použitá metodika a instrumentace

Vzorky byly připraveny smícháním supernatantu kultivačního média a ethanolu v poměru 1:1. Na speciální destičku DPiMS-2020 bylo naneseno 10 µl každého vzorku a provedeny měření v režimu skenování. Získaná hmotnostní spektra byla exportována pro vícerozměrnou analýzu.

Použitá instrumentace

• DPiMS-2020 hmotnostní spektrometr
• Probe Electro Spray Ionization
• eMSTAT Solution pro vícerozměrnou statistickou analýzu

Hlavní výsledky a diskuse

Vícerozměrná analýza umožnila jasně oddělit kultivační média diferenciovaných a nediferencovaných buněk. Porovnání vzorků kultivace po 2 a 7 dnech ukázalo posun v distribučním prostoru, přičemž u skupin D2 adherentních a D7 diferenciovaných buněk došlo k překryvu, naznačujícímu obdobný stupeň diferenciace.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda dovoluje získat data potřebná pro vícerozměrnou analýzu za přibližně 3 minuty na vzorek včetně přípravy. Vyžaduje minimální množství buněk, zrychluje hodnocení stavu diferenciace a je vhodná pro rutinní kontrolu kvality v laboratořích regenerativní medicíny.

Budoucí trendy a možnosti využití

• Automatizace přípravy vzorků a měření
• Rozšíření aplikace na další typy kmenových a diferenciovaných buněk
• Integrace on-line monitorování diferenciace buněk
• Využití umělé inteligence pro pokročilou analýzu spekter

Závěr

Spojení Probe Electro Spray Ionization na DPiMS-2020 a statistického zpracování v eMSTAT Solution poskytuje rychlý, citlivý a jednoduchý přístup k hodnocení stupně diferenciace iPS buněk, s vysokým potenciálem pro použití v rámci kvality a výzkumu v regenerativní medicíně.

Reference

• Sakashita N, Saiki H. Evaluation of differentiated/undifferentiated state of iPS cells using DPiMS-2020 and eMSTAT Solution. Shimadzu Application Note B108; 2020.