Analysis of Kratom’s Main Psychoactive Components: Mitragynine and 7-Hydroxymitragynine

Význam tématu

Kratom, tropická rostlina původem ze jihovýchodní Asie, obsahuje alkaloidy mitragynin a 7-hydroxymitragynin, jež působí na opioidní receptory a vyvolávají sedaci, analgezii a euforii. S rostoucí popularitou kratomu v rekreačním a zdravotním sektoru a obavami z možného zneužívání je klíčové vyvinout citlivé a spolehlivé analytické metody pro jeho kontrolu v biologických vzorcích, zejména v moči.

Cíle a přehled studie / článku

Studie popisuje kvantitativní metodu LC-MS/MS se Scheduled MRM™ na systému SCIEX QTRAP® 4500 pro detekci a stanovení mitragyninu a 7-hydroxymitragyninu v lidské moči v rozsahu 2–500 ng/mL. Hlavním cílem bylo maximalizovat citlivost, přesnost a robustnost analýzy vhodné pro forenzní i klinické laboratoře.

Použitá metodika a instrumentace

Postup přípravy vzorku využívá jednoduchou hydrolyticky aktivovanou protokol „dilute-and-shoot“:

• Vzorky moči jsou inkubovány s β-glukuronidázou pro uvolnění konjugovaných forem.
• Po centrifugaci se nadložný roztok ředí vzorkovým ředidlem a vstřikuje do LC-MS/MS.

Chromatografie probíhá na ExionLC™ AC systému s biphenylovou kolonkou (50 × 3 mm, 2,6 μm), mobilními fázemi s formiovou kyselinou ve vodě a formiovou kyselinou v metanol-acetonitrilu, běh trvá 4,5 min při injekčním objemu 10 μL. Hmotnostní spektrometrie je prováděna v kladném režimu ESI na QTRAP® 4500 se Scheduled MRM™ algoritmem pro optimalizované pořadí dávek a maximální dobu sběru dat.

Podrobná instrumentace:

• SCIEX QTRAP® 4500 se zdrojem Turbo V™ a rozhraním Curtain Gas™
• QJet® Ion Guide pro vyšší zachytávání iontů
• Zakřivená LINAC® kolize pro kratší časy pauz a dwell time
• Scheduled MRM™ pro zvýšení doby sběru dat na jednotlivé přechody

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda dosáhla dolní meze kvantifikace (LLOQ) 2 ng/mL s poměrem signál/šum >10. Linearity kalibračních křivek pro oba analyty překročila R2 >0,99 v rozsahu 2–500 ng/mL. Preciznost a přesnost v testovaných kontrolách (10 a 200 ng/mL) splňovala kritérium ≤20 % CV a ±20 % bias. Retenční časy zůstaly stabilní během více než 70 injekcí (variabilita <0,1 %). Nebyl zjištěn carryover po vzorcích s koncentrací ULOQ (500 ng/mL).

Přínosy a praktické využití metody

Metoda nabízí:

• Rychlý analytický běh 4,5 minuty
• Jednoduchou přípravu vzorku bez náročné extrakce
• Vysokou citlivost vhodnou pro nízkokoncentrované analyty
• Robustnost pro forenzní a klinické screeningy

Budoucí trendy a možnosti využití

Rozšíření metody na další alkaloidy a metabolity kratomu v různých biologických matricích (krev, sliny); implementace vysokopropustných formátů analýzy; integrace automatizované přípravy vzorků; využití HRMS pro nenáhodné screeningy; vývoj point-of-care zařízení s mikrofluidními kartami.

Závěr

Vyvinutá LC-MS/MS metoda se Scheduled MRM™ na systému QTRAP® 4500 pro kvantifikaci mitragyninu a 7-hydroxymitragyninu v lidské moči prokázala vynikající citlivost, linearitu, preciznost i robustnost. Díky jednoduché přípravě vzorku a krátké době analýzy je vhodná pro forenzní, klinické i regulační aplikace.

Reference

1. National Institute on Drug Abuse. Kratom DrugFacts. 2020.
2. U.S. DEA. Announcement of Intent to Schedule Kratom. 2016.