Analysis of pharmaceuticals and drug related impurities using Agilent instrumentation

Význam tématu

V oblasti farmaceutické kontroly kvality je nezbytné spolehlivě stanovovat léčivé látky a jejich související nečistoty tak, aby byla zajištěna bezpečnost a účinnost finálního přípravku. Paracetamol je jednou z nejrozšířenějších analgetických a antipyretických látek a evropské (EP) i americké (USP) farmakopeální předpisy vyžadují přísné limity pro jeho nečistoty. Zavedení robustních a rychlých metod HPLC přispívá k efektivitě výrobních a kontrolních procesů, snižuje čas i provozní náklady a zároveň splňuje přísné regulatorní požadavky.

Cíle a přehled studie / článku

Studie si klade za cíl:

• Vyvinout a validovat izokratickou HPLC metodu pro stanovení paracetamolu a jeho nečistot (A, B, F, H, I, J, K) v souladu s požadavky EP a doporučeními USP.
• Srovnat výkonnost dvou přístrojových konfigurací: kompaktního Agilent 1120 Compact LC a standardního Agilent 1200 Series LC.
• Zhodnotit chromatografické parametry (rozlišení, citlivost, přesnost) a prokázat srovnatelnost výsledků obou systémů.

Použitá metodika a instrumentace

Srovnávací měření proběhla na obou zařízeních se stejným analytickým sloupcem ZORBAX StableBond-C8 (4,6 × 250 mm, 5 µm), izokratickým pohonem (flow 1,5 mL/min), mobilní fází sestavenou z vodného pufru fosfátů a metanolu podle EP, teplotou 35 °C a UV detekcí při 245 nm.

Konfigurace Agilent 1120 Compact LC:

• Gradient pumpa s nízkým objemem mrtvého prostoru a vakuuová odplyňovač
• Autosampler, termostatický ohřívač sloupce, detektor VWD (14 µL), software EZChrom Elite Compact

Konfigurace Agilent 1200 Series LC:

• Quaternary pumpa s odplyňovačem
• Autosampler, termostatická kolona, DAD (13 µL), software ChemStation

Hlavní výsledky a diskuse

Systémová příprava a měření:

• Reference (5 mg paracetamolu + 5 mg každé nečistoty na 20 mL methanolu, dále 1 mL na 250 mL mobilní fáze)
• Kontrola signál–šum, rozlišení a přesnosti prováděná na 10 injekcích

Obě konfigurace poskytly chromatogramy srovnatelné kvality. Naměřené parametry:

• Rozlišení vůči nečistotě K a paracetamolu > 4 (požadavek EP)
• Signal–šum pro nečistotu J > 50
• Přesnost ploch RSD < 2 % pro všechny hlavní i vedlejší vrcholy
• Přesnost retencí RSD < 0,5 %

Menší rozdíly mezi přístroji byly v objemech mrtvého prostoru a nastavení detekce, bez vlivu na chrakter metodické validity.

Přínosy a praktické využití metody

Validovaná izokratická metoda umožňuje spolehlivé a citlivé stanovení paracetamolu a sedmi farmakopeálních nečistot s jednoduchým provedením. Díky nízkým nárokům na gradientní pohon a robustnímu nastavení je vhodná pro rutinní analytiku ve výrobních a kontrolních laboratořích i menších klinických pracovištích.

Budoucí trendy a možnosti využití

• Integrace vyšší propustnosti a striktně kontrolovaného objemu mrtvých prostor v kompaktních LC systémech pro další zkrácení analýz.
• Automatizace přípravy vzorků a on-line kvalifikace systému dle farmakopeálních doporučení.
• Rozšíření o hmotnostní detekci (LC–MS) pro simultánní kvalitativní ověření neznámých degradátů.
• Využití MALDI–DAD kombinace pro vysokokapacitní screening nečistot v biofarmaceutických matricích.

Závěr

Srovnání Agilent 1120 Compact LC a Agilent 1200 Series LC ukázalo, že kompaktní systém je ve své třídě plně srovnatelný a splňuje přísné farmakopeální požadavky na stanovení paracetamolu a jeho nečistot. Oba instrumenty předvedly vynikající rozlišení, citlivost i opakovatelnost vyhovující limitům EP a USP.

Reference

• European Pharmacopoeia 7.0: Monograph „Paracetamol“
• USP Official 8/1/08 General Chapter <621> „Chromatography, System Suitability“