Direct injection of plasma samples after ultrafiltration into programmed temperature vaporiser-gas chromatography-mass spectrometry with packed liner

Význam tématu

Directní injekce ultrafiltrátu plazmy do plynové chromatografie představuje významné zjednodušení přípravy biologických vzorků. Odstraňuje potřebu časově náročných extrakčních postupů a umožňuje rychlejší analýzu farmakokinetických parametrů léčiv a jejich metabolitů ve farmaceutickém výzkumu i v klinické praxi.

Cíle a přehled studie / článku

Studie si klade za cíl ověřit možnost přímé injekce ultrafiltrátu plazmy obohaceného o kyselinu fosforečnou do GC-MS pomocí programovaného teplotního vaporizéru (PTV) s plněným injekčním linerem. Modelovými sloučeninami jsou lokální anestetikum ropivakain a jeho metabolit PPX.

Použitá metodika a instrumentace

• Příprava vzorku: 500 μl plazmy + 75 μl 2M kyseliny fosforečné; ultrafiltrace Centrisart I (20 000 Da); do ultrafiltrátu přidán interní standard 2H7-ropivakain; injekce 50 μl.
• GC-PTV: Agilent HP 5890 Series II s PTV OPTIC 2 (ATAS International); liner 80×3,2 mm plněný ATAS „A“ packing; program teploty injektoru 50 °C → 300 °C (5 °C/s), odvětrání 7 min, split 50 ml/min.
• Kolona: BPX35 (35 % fenyl-polysilfenyl-siloxan).
• MS: Finnigan SSQ 710B, transfer line 330 °C, iontové zdroj 250 °C, EI 70 eV, scan 70–300 amu.

Hlavní výsledky a diskuse

• Linearita měření: spolehlivá do objemu injekce 100 μl ultrafiltrátu.
• Limity kvantifikace: 1,1 nM (301 pg/ml) pro ropivakain a 1,4 nM (325 pg/ml) pro PPX.
• Přesnost a opakovatelnost: vnitrodenní CV 3–12 %, mezidenní 8–16 % pro oba analytické cíle; recovery 102–112 % (ropivakain), 110–117 % (PPX).
• Životnost lineru: ~20 injekcí, poté nutná výměna kvůli adsorpci bílkovin.
• Carry-over menší než 2 %.
• Metoda nepotřebuje další předúpravu extrakcí, nevznikají rušící chromatografické špičky ani poškození GC-MS.

Přínosy a praktické využití metody

Pro bioanalytické laboratoře metoda znamená zkrácení doby na přípravu vzorku, snížení spotřeby chemikálií a minimalizaci variability způsobené vícekrokovými extrakcemi. Je vhodná pro farmakokinetická a toxikologická měření, screening metabolitů i rutinní kontrolu kvality léčiv.

Budoucí trendy a možnosti využití

Optimalizace životnosti linera (back-flush systémy, snížení injikovaného objemu), rozšíření aplikace na další třídy léků a jejich metabolitů, integrace s automatizovanými přístroji a vývoj plně online postupů kombinujících ultrafiltraci a GC-MS.

Závěr

Studie prokázala, že přímá injekce ultrafiltrátu plazmy do GC-MS pomocí PTV s plněným linerem je validní a citlivá metoda pro stanovení ropivakainu a jeho metabolitu. Nabízí významné zjednodušení analytického postupu a je vhodná pro široké spektrum bioanalytických aplikací.

Reference

• [1] A.J.H. Louter, J. van Doommalen, J.J. Vreuls, U.A.Th. Brinkman, High Resolut. Chromatogr. 19 (1996) 679.
• [2] R.J.C.A. Steen, R.R. Freriks, W.P. Cofino, U.A.Th. Brinkman, Anal. Chim. Acta 535 (1997) 153.
• [3] J. Teske, J. Efer, W. Engewald, Chromatographia 47 (1998) 35.
• [4] W. Engewald, J. Teske, J. Efer, J. Chromatogr. A 842 (1999) 143.
• [5] W. Engewald, J. Teske, J. Efer, J. Chromatogr. A 856 (1999) 259.
• [6] P. Korytár, E. Matišová, H. Lefierová, I. Slobodník, High Resolut. Chromatogr. 23 (1999) 149.
• [7] M.W. van Hout, R.A. de Zeeuw, I.P. Franke, G.I. de Jong, J. Chromatogr. B 729 (1999) 199.
• [8] M. Engrman, P. Neidénström, C. Norsten-Höög, S.-J. Wiklund, U. Bondesson, T. Arvidsson, J. Chromatogr. B 709 (1998) 57.
• [9] T. Arvidsson, Y. Askemark, M.M. Halldin, Biomed. Chromatogr. 13 (1999) 286.
• [10] M. Abdel-Rehim, M. Bielenstein, Y. Askemark, N. Tyrefors, T. Arvidsson, J. Chromatogr. B 741 (2000) 175.
• [11] H.S. Feldman, in: S.A. Rice, K.J. Fish (Eds.), Anaesthetic Toxicity, Raven Press, New York, 1994, p. 107.
• [12] M. Abdel-Rehim*, K.A. Svensson, Y. Askemark, K.-J. Pettersson, J. Chromatogr. B 755 (2001) 253–258.