Simple and Efficient Purification of Semaglutide Using the Agilent 1290 Infinity II Preparative LC System

Význam tématu

Semaglutide je dlouhodobě působící peptidový agonista GLP-1 receptoru s klíčovým významem při léčbě diabetu 2. typu a obezity. Vysoce čisté formy jsou nezbytné pro validaci generických přípravků, analýzu vyšších struktur a zajištění shody s regulatorními požadavky.

Cíle a přehled studie

Cílem bylo vyvinout a ověřit efektivní preparativní HPLC metodu pro izolaci semaglutidu z komerčních drug products Ozempic a Wegovy. Studie demonstrovala selektivní frakcionaci hlavní látky od excipientů, vysokou reprodukovatelnost přípravy frakcí a následnou kontrolní analýzu čistoty.

Použitá metodika a instrumentace

Ultrapřípravný systém Agilent 1290 Infinity II Preparative LC složený z binary pumpy (50 mL), open‐bed sampleru/collectoru a DAD detektoru (UV 280 nm). Analytická kontrola proběhla na Agilent 1260 Infinity III Prime Bio LC se sloupci AdvanceBio Peptide Plus (2,1×150 mm, 2,7 µm) s DAD detekcí. Použito mobilní fáze s 0,05 % formic acid pro preparativní režim a 0,4 % TFA pro analytický režim.

Hlavní výsledky a diskuse

Podmínky s 0,05 % FA umožnily čisté oddělení semaglutidu od excipientů v časech 2–4,5 min.

• Ozempic: 6× injekce po 1 mL, %RSD retenčních časů 0,12 %, ploch vrcholů 1,08 %.
• Reanalýza frakcí potvrdila téměř úplné odstranění excipientů a vysokou návratnost semaglutidu.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda umožňuje rychlou a jednoduchou přípravu vysoce čistého semaglutidu pro:

• 3D strukturální a fyzikálně-chemické studie (CD, NMR, rentgenografie).
• Vývoj a kontrolu generických verzí léčiva.
• Standardizované QA/QC postupy v biotechnologickém průmyslu.

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekávané směry zahrnují:

• Adaptaci postupu na další peptidové léčiva.
• Integraci s hmotnostní spektrometrií pro identifikační studia.
• Rozšíření kapacity a přechod na kontinuální preparativní systémy.
• Optimalizaci ekologičtějších mobilních fází a méně toxických modifikátorů.

Závěr

Vyvinutá preparativní HPLC metoda s nízkou koncentrací kyseliny formiové prokázala vynikající selektivitu a reprodukovatelnost při izolaci semaglutidu z komerčních přípravků. Získané frakce jsou vhodné pro detailní strukturální charakterizaci i kontrolu kvality generických produktů.

Reference

1. Lincoff AM, Brown-Frandsen K. Semaglutide and Cardiovascular Outcomes in Obesity without Diabetes. N Engl J Med. 2023;389(24):2221–2232.
2. Anderer S. FDA Approves Generic Liraglutide to Address GLP-1 Drug Shortage. JAMA. 2025;333(9):746–746.
3. Kuril AK, Saravanan K. Analytical Considerations for Characterization of Generic Peptide Product: A Regulatory Insight. Anal Biochem. 2024;694:115633.
4. Kim Y, Bigelow L. High-Throughput Protein Purification for X-Ray Crystallography and NMR. Adv Protein Chem Struct Biol. 2008;75:85–105.
5. Sikora K, Maciej J. The Role of Counter-Ions in Peptides—An Overview. Pharmaceuticals. 2020;13(12):442.
6. Agilent Technologies. Efficient Method Optimization of Semaglutide Analysis Using an Agilent 1260 Infinity II Bio Prime LC System and Blend Assist. Application Note 5994-7414EN. 2024.
7. Agilent Technologies. Rapid Confirmation of GLP-1 Analog (Liraglutide) Using Agilent InfinityLab LC/MSD iQ. Application Note 5994-7415EN. 2024.