Xcalibur LCquan Quantitative Analysis of a Three-Drugs Data Set Tutorial - Software Version 2.9

Význam tématu

Kvantifikace nízkokoncentračních analy­tů v komplexních matricích je klíčová v klinické, toxikologické a farmaceutické praxi. Přesné stanovení hladin psychofarmak podporuje rozhodování v terapii, zajišťuje kontrolu kvality léčiv a umožňuje forenzní analýzy.

Cíle a přehled studie

Tým Thermo Fisher Scientific připravil výukový příklad kvantitativní analýzy směsi tří léčiv (paroxetin, nefazodon, alprazolam) s použitím LC-MS/MS a kontrolního softwaru LCquan. Hlavní kroky zahrnují:

• Vytvoření studijní struktury a pracovního sešitu
• Definici sekvence akvizice a import dat
• Průzkum chromatogramů a výběr parametrů detekce
• Sestavení metody zpracování včetně identifikace a integrace piků
• Vytvoření a revizi zpracovatelské sekvence
• Zpracování dat, ověření standardů, QC a vzorků neznámých koncentrací
• Generování vlastních reportů v Excelu

Použitá metodika a instrumentace

Analytika proběhla metodou kapalinové chromatografie s dvojskupinovým režimem SRM na hmotnostním spektrometru v ESI módu. Použité platformy:

• Kontrolní software: Xcalibur 3.0, LCquan 2.9
• Hmotnostní spektrometry: TSQ Endura 1.0, TSQ Quantiva 1.0
• Kapalinové přístroje: Accela UHPLC, LC Devices 2.8+
• Operační systém: Microsoft Windows 7 Professional SP1

Hlavní výsledky a diskuse

Průzkum chromatogramů ukázal tři vymezené píky při retenčních časech ca 1,90 (paroxetin), 2,41 (nefazodon) a 2,68 minut (alprazolam a internal standard alprazolam-d5). Získané produkty iontů s vysokou intenzitou (paroxetin: m/z 192,07; nefazodon: m/z 274,08; alprazolam: m/z 205,02) sloužily k selektivní detekci. Kalibrační křivky všech složek vykázaly lineární závislost v rozsahu 25–1000 pg/ml, s vážením 1/x u druhého a třetího analy­tu, anebo bez vážení. QC vzorky (37,5; 175; 875 pg/ml) prokázaly opakovatelnost pod 15 % RSD.

Přínosy a praktické využití metody

Publikovaná procedura nabízí robustní a standardizovaný pracovní postup pro průmyslové i akademické laboratoře. Výhody:

• Automatizovaný import, zpracování a reporting v LCquan
• Možnost přizpůsobení detekčních parametrů (Genesis, ICIS)
• Integrovaná správa kalibrací a interních standardů
• Generování přehledných Excel reportů pro QA/QC

Budoucí trendy a možnosti využití

Další rozvoj může zahrnovat:

• Integraci s vysokým rozlišením (HR-MS) a iontovými pasti
• Cloudové ukládání a zpracování dat
• Automatizované optimalizační nástroje a strojové učení
• Rozšíření na biomarkery a environmentální sledování

Závěr

Tutorial ilustruje kompletní end-to-end workflow kvantitativní LC-MS/MS analýzy psychofarmak pomocí Xcalibur/LCquan – od založení studie až po výstupy v Excelu. Metoda je vhodná pro rutinní provoz i výzkum, nabízí vysokou přesnost, flexibilitu a transparentní zpracování dat.