ANALYZING PHMB BY HPLC

Význam tématu

Polyhexanid (PHMB) je polydisperzní antimicrobická látka s širokým využitím v medicíně, průmyslu a biologickém výzkumu. Díky silným antiseptickým vlastnostem se často aplikuje na povrchy náchylné k bakteriální kontaminaci. Analytická kvantifikace PHMB je však náročná kvůli interakcím se silanolovými skupinami, vícečetným nábojům v různém pH, nízké UV absorpci nad 230 nm, chelatačním vlastnostem kovů v HPLC systému a širokému rozptylu molekulových hmot.

Cíle a přehled studie

Cílem prezentované práce je představit tři vysoce selektivní metody HPLC analýzy PHMB, založené na proprietární technologii Bridge Ion Separation Technology (BIST™). Každá metoda cílí na odlišné aspekty vzorku: celkový obsah, separaci od excipientů a frakcionaci podle oligomerů.

Použitá metodika a instrumentace

Metoda 1: Rychlá kvantifikace celkového PHMB

• Kolona BIST™ B+ (4,6×250 mm, 5 µm)
• Jednotná mobilní fáze: MeCN/H₂O 40/60 % s 20 mM ammonium formiátu, pH 3,0
• Rychlost průtoku: 0,5 mL/min; detekce UV při 236 nm
• Analýza dokončena za méně než 6 min, lineární odezva s R²>0,999

Metoda 2: Oddělení PHMB od excipientů

• Kolona BIST™ B+ (4,6×50 mm, 5 µm)
• Krokový gradient MeCN/H₂O 60/40 % → 0/100 % (po 2 min), modifikátor H₂SO₄ 0,2 % v mobilní fázi
• Rychlost průtoku 1,0 mL/min; detekce UV při 210 nm
• Optimalizace poměru a délky kroků umožňuje řídit retenci PHMB vůči dalším složkám

Metoda 3: Separace PHMB podle molekulové hmotnosti

• Kolona BIST™ B+ (4,6×50 mm, 5 µm)
• Reverzní gradient MeCN/H₂O 80/20 % → 20/80 % během 60 min, modifikátor H₂SO₄ 0,2 %
• Rychlost průtoku 1,0 mL/min; detekce UV při 210 nm
• Dlouhá metoda poskytuje profil jednotlivých oligomerů PHMB podle molekulové hmotnosti a náboje

BIST™ vysvětlení

BIST™ využívá dvojmocné ionty (např. ze síranu) jako most mezi stejně nabitým analytem a stacionární fází. Snižuje obsah vody v mobilní fázi, aby se zamezilo solvaci iontů a umožnil se elektrostatický můstek. Podmínky:

• dvojmocný iont v mobilní fázi
• opačná polarita iontu a povrchu stacionární fáze
• snížený podíl vody pro omezení solvace

Hlavní výsledky a diskuse

Všechny tři metody prokázaly vysokou opakovatelnost a linearitu. Metoda 1 nabízí rychlou kvantifikaci, metoda 2 selektivně odstraňuje excipienty a metoda 3 rozebírá složení PHMB podle oligomerů. Díky BIST™ je dosaženo výrazně lepší retence i u více nabitých analýz.

Přínosy a praktické využití metody

Implementace BIST™ umožňuje:

• Rychlou a přesnou kvantifikaci celkového PHMB
• Selektivní separaci v komplexních formulacích
• Detailní charakterizaci molekulové hmotnostní distribuce

To ocení výzkumná a kontrolní QC laboratoře v biomedicíně i průmyslových aplikacích.

Budoucí trendy a možnosti využití

Další rozvoj BIST™ může zahrnovat aplikace na jiné polyionty a biomakromolekuly, integraci s hmotnostní spektrometrií pro pokročilou identifikaci a vývoj miniaturizovaných systémů pro vysokopropustné analýzy.

Závěr

Proprietární BIST™ technologie nabízí robustní řešení pro analýzu PHMB v různých typech vzorků. Tři představené metody pokrývají potřeby od rychlé kvantifikace až po detailní frakcionaci oligomerů.

Reference

SIELC Technologies, Inc., 'BY HPLC ANALYZING PHMB', 2022; U.S. Patents Pending; interní data SIELC Technologies labs.