LC/HRMS, LC/MS, LC/MS/MS, LC/Orbitrap
ZaměřeníProteomika
VýrobceThermo Fisher Scientific
Význam tématu
Analýza natívních biomolekulárních struktur a proteoform vyžaduje špičkové hmotnostní spektrometry s vysokou citlivostí, rozlišením a všestrannými fragmentačními možnostmi. Orbitrap Ascend Structural Biology Tribrid kombinuje moderní hardware a pokročilý software tak, aby umožnil detailní charakterizaci intactních proteinů, komplexů i peptidů s minimální přípravou vzorku a vysokou pracovní kapacitou.
Cíle a přehled studie / článku
Cílem dokumentu je představit hlavní vlastnosti a technologické inovace Orbitrap Ascend Tribrid hmotnostního spektrometru. Popisuje klíčové komponenty, možnosti fragmentací, provozní režimy a výkonová data, která demonstrují převratnou citlivost, rychlost akvizice a šíři aplikací.
Použitá instrumentace
Ultrahigh-field tribridní spektrometr s dual-pressure ion trapem a Orbitrap analyzátorem Doporučené iontové zdroje:
- Auto-Ready ESI pro automatickou kalibraci
- EASY-ETD a PTCR pro orthogonální fragmentace
- Volitelné UVPD pro fotodissociaci
- Natívní MS modul pro rozšířenou m/z oblast
Hmotnostní analyzátory:
- QR5 hyperbolický kvadrupól
- Dual ion routing multipoly
- Orbitrap s rozlišením až 480 000 FWHM
- Lineární iontový past s vícenásobnou detekcí
Vakuový systém s vícestupňovými turbomolekulárními pumpami, suché olejové vakuové pumpy a volitelný FAIMS Pro Duo rozhranní.
Softwarové prostředí:
- Xcalibur pro ovládání instrumentu
- Precursor Fit, Real-Time Search a Dynamic Maximum Injection Time
- Proteome Discoverer, Compound Discoverer a AcquireX workflow
Hlavní výsledky a diskuse
Výkonnostní testy prokázaly:
- MS/MS akvizice až 45 Hz v Orbitrapu a 50 Hz v iontové pasti
- Citlivost ESI testovaná na reserpinu s S/N >200:1
- Orbitrap accuracy <1 ppm při interní kalibraci
- Nativní MS detekce až m/z 16 000 a izolace v kvadrupólu do m/z 8000
- Stabilní ETD/PTCR iontové reakce s vysokou fragmentační účinností
Paralelní zpracování MS a MSn, synchronní výběr prekurzorů (SPS) a pokročilé algoritmy pro real-time vyhledávání významně zvýšily objem a kvalitu dat bez nutnosti složité optimalizace metod.
Přínosy a praktické využití metody
Orbitrap Ascend Tribrid nabízí:
- Maximalizovanou propustnost laboratoře díky předpřipraveným šablonám a automatizaci
- Flexibilitu v experimentech HDX, crosslinking, TMT kvantifikace i natívní MS
- Škálovatelné rozlišení a izolační šířky pro různé hmotnostní rozsahy
- Spolehlivou a bezúdržbovou kalibraci s Auto-Ready zdrojem
Užitečné v proteinové charakterizaci, strukturální biologii, biomedicínském výzkumu i QC v biotechnologiích.
Budoucí trendy a možnosti využití
Integrace širších iontových modulů, vyšší frekvence fotodissociace UVPD a pokročilé metody návrhu experimentů s umělou inteligencí umožní další zvýšení citlivosti, selektivity a automatizace. Rozvoj cloudových řešení pro analýzu dat a propojitelnost s cryo-EM či NMR přinese komplexní pohled na struktury biomolekul.
Závěr
Orbitrap Ascend Structural Biology Tribrid představuje špičkové řešení pro všestrannou analýzu intactních proteinů a peptidů. Spojení inovativního hardware, bohatého softwarového vybavení a univerzálních fragmentačních možností zrychluje a zpřesňuje strukturální studia v komplexních aplikacích.
Reference
Bez explicitně uvedených literárních zdrojů
Obsah byl automaticky vytvořen z originálního PDF dokumentu pomocí AI a může obsahovat nepřesnosti.