ENHANCING ANALYTICAL PERFORMANCE WITH A BIO-INERT HPLC SYSTEM

Význam tématu

Biologicky inertní HPLC systémy jsou v biochemické a biofarmaceutické analýze klíčové pro eliminaci nežádoucích interakcí mezi analyty a kovovými povrchy. U molekul s elektronově bohatými skupinami, jako jsou oligonukleotidy, peptidy nebo monoklonální protilátky, tyto interakce snižují rozlišení, obnovitelnost signálu a celkovou návratnost. Zavedení hybridních organicko-anorganických povlaků MaxPeak HPS na vnitřní komponenty HPLC přináší významné zlepšení analytické přesnosti a reprodukovatelnosti.

Cíle a přehled studie

Cílem práce bylo ověřit výkonnost nové bio-inertní HPLC soustavy Alliance iS Bio, vybavené povrchy MaxPeak HPS, v porovnání s běžným (legacy) HPLC systémem. Studie zahrnovala analýzu oligonukleotidů (15–35 mer oligodeoxythymidinů a plně thiolovaných oligonukleotidů GEM91), monoklonálních protilátek a GLP-1 peptidů pomocí iontově párové RPLC, klasické RPLC a SEC metod.

Použitá metodika

Metody z legacy systému byly bez změny chemických podmínek převedeny na Alliance iS Bio systém. Pro oligonukleotidy se použila gradientní iontově párová RPLC s hexylamoniovým octanem (HAA) jako iontovým párem. Pro mAb a GLP-1 peptidy byly uplatněny standardy pro reverzní fázovou chromatografii a velikostní exkluzi. Systémy byly provozovány při teplotě 60 °C, průtoku 0,65 mL/min pro OST standard a 0,50 mL/min pro GEM91, detekováno při 260 nm.

Použitá instrumentace

• Alliance iS Bio HPLC System s povrchy MaxPeak HPS
• Legacy HPLC System (nerezové komponenty)
• Kolony XBridge BEH C18 5 µm, 130 Å, 4,6×100 mm
• Kolona XBridge Premier Oligonucleotide BEH C18 2,5 µm, 130 Å, 4,6×100 mm

Hlavní výsledky a diskuse

• Oligonukleotidy: Systém Alliance iS Bio přinesl až o 30 % vyšší výšku píků (15–35 mer) a plné maximální obnovitelnosti signálu v kratším čase bez předchozí pasivizace povrchu.
• GEM91: Pro sledování stopových nečistot se dosáhlo přibližně 40 % zvýšení poměru signál/šum oproti legacy systému, což zvyšuje schopnost detekce a kvantifikace klíčových impurit.
• Monoklonální protilátky a GLP-1 peptidy: Bio-inertní povrchy zlepšily stabilitu retenčních časů a konstantní obnovitelnost mAb standardů i peptidových vzorků na SEC a RPLC kolónách.

Přínosy a praktické využití metody

Bio-inertní HPLC systém s povrchy MaxPeak HPS výrazně zkracuje čas potřebný k dosažení plné obnovitelnosti, odstraňuje nutnost dlouhodobých pasivačních postupů a poskytuje spolehlivější data pro vývoj i kontrolu kvality biologických léčiv. Zvýšená citlivost a opakovatelnost měření podporují robustní procesy v laboratorních i výrobních provozech biotechnologických společností.

Budoucí trendy a možnosti využití

S nástupem nových biologických látek a konjugátů je očekáván širší rozsah uplatnění bio-iner­tních povrchů i v ostatních chromatografických režimech (iontová výměnná chromatografie, hydrophilní interakční kapalinová chromatografie). Další vývoj povrchových technologií může přinést komplexní povlaky pro redukci adsorpce i u dalších biopolymerů a nanomateriálů.

Závěr

Alliance iS Bio HPLC System vybavený MaxPeak HPS povrchy prokázal výrazné zlepšení analytického výkonu oproti tradičním nerezovým systémům. Zvýšení obnovitelnosti, citlivosti a stability retenčních časů potvrzuje, že bio-inertní technologie jsou zásadní pro přesnou charakterizaci pokročilých biologických analytů.