Characterization of Unsaturated Fatty Acids in Negative OAD-MS/MS using LCMS-9050

Význam tématu

Analýza nenasýcených mastných kyselin je klíčová pro porozumění biologickým procesům, identifikaci lipidových biomarkerů a kontrole kvality potravin. Tradiční nízkoenergetická CID-MS/MS nedokáže přesně lokalizovat dvojnou vazbu v řetězci, což omezuje schopnost rozlišit izomery.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem bylo implementovat a ověřit metodu Oxygen Attachment Dissociation MS/MS (OAD-MS/MS) v negativním iontovém režimu na přístroji Shimadzu LCMS-9050. Studie porovnala OAD s konvenční CID a HAD fragmentací při analýze referenčních tukových kyselin a extraktů z mozkových lipidů myši.

Použitá metodika a instrumentace

HPLC podmínky:

• Systém Shimadzu Nexera X3
• Column Acquity UPLC Peptide BEH C18 (50×2.1 mm, 1.7 µm)
• Mobile phase A: ACN:MeOH:Voda (1:1:3) s 5 mM uhličitanem amonným a 10 nM EDTA
• Mobile phase B: IPA s 5 mM uhličitanem amonným a 10 nM EDTA
• Gradient: 0 % B (0–1 min); 40 % B (5 min); 64 % B (7.5–12 min); 82.5 % B (12.5 min); 95 % B (20 min); reekvilibrace do 0 % B (25 min)
• Průtok 0.3 mL/min

MS podmínky:

• Shimadzu LCMS-9050 Q-TOF
• Režim OAD, negativní ESI
• CE: +10 V, Auto-MS/MS Top 10
• Vstupní vzorek: lipidový extrakt z myšího mozku s přídavkem komerčních standardů mastných kyselin

Hlavní výsledky a diskuse

OAD-MS/MS selektivně oxiduje a štěpí dvojnou vazbu, čímž generuje charakteristické fragmenty pro lokalizaci C=C. Metoda prokázala vyšší specificitu než HAD, nižší komplikovanost spekter než u nízkoenergetické CID a schopnost rozlišit izomerní nenasycené mastné kyseliny (např. n-6, n-7, n-9 pozice).

Přínosy a praktické využití metody

Metoda OAD-MS/MS v negativním režimu nabízí:

• Přímou a rychlou identifikaci polohy dvojných vazeb bez derivatizace
• Zvýšenou přesnost při lipidové charakterizaci v lipidomice
• Možnost aplikace v QA/QC potravinářství a biomedicínském výzkumu

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se rozšíření techniky OAD-MS/MS v kombinaci s dalšími radikálově indukovanými fragmentacemi, automatizace analýz a integrace do vysokopropustných lipidomických platforem. Potenciál má i v klinických studiích pro přesnou diagnostiku lipidových poruch.

Závěr

Negativní OAD-MS/MS na LCMS-9050 představuje výkonný nástroj pro detailní strukturální analýzu nenasýcených mastných kyselin. Metoda překonává limity CID a poskytuje jednoznačnou lokalizaci dvojných vazeb bez složité přípravy vzorku.

Reference

• Uchino H et al Commun Chem 5 162 (2022)
• Takahashi H et al Anal Chem 2018 90 12 7230