Sensitive and Robust Method for Estimation of Mometasone at Sub-pg/mL in Human Plasma Using Shimadzu LCMS-8060NX

Význam tématu

Quantifikace mometasonu furoátu v lidské plazmě na úrovni sub-pg/mL je zásadní pro farmakokinetické studie a hodnocení bioekvivalence. Nízká biologická dostupnost a extrémně nízké plazmatické koncentrace vyžadují vysoce citlivé a selektivní analytické metody.

Cíle a přehled studie

Cílem studie bylo vyvinout a validovat robustní LC-MS/MS metodu pro kvantitativní stanovení mometasonu furoátu v lidské plazmě pomocí systému Shimadzu LCMS-8060NX. Metoda má dosáhnout LLOQ 0,50 pg/mL a lineární rozsah 0,50–20 pg/mL při jednoduchém jednokrokovém odběru vzorku.

Použitá metodika

Vzorky plazmy před analýzou podstoupily pevnou fázi extrakci (SPE) s následujícím postupem: kondicionace a ekvilibrace kolonek methanolem a vodou, naložení plazmy s extrakčním pufrem, promytí dvou kroky, eluce organickou fází, odpaření a rehydratace. Chromatografické podmínky zahrnovaly kolonu Shim-pack Velox C18, mobilní fázi methanol : 0,01% kyselina mravenčí v 5 mM acetátovém pufru (90:10), průtok 0,5 mL/min, teplotu 50 °C a objem injekce 50 µL. V hmotnostním spektrometru v pozitivním módu ESI byly sledovány MRM přechody m/z 520,9 > 355,15 při optimalizovaném napětí a teplotě.

Použitá instrumentace

• UHPLC systém Nexera X2
• Hmotnostní spektrometr Shimadzu LCMS-8060NX
• Kolona Shim-pack Velox C18 (100 × 2,1 mm, 2,7 µm)
• Software Shimadzu LabSolutions

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda prokázala vysokou selektivitu bez interferencí v šesti plazmatických maticích. Lineární závislost v rozsahu 0,50–20 pg/mL vykazovala korelační koeficient R² > 0,99. LLOQ 0,50 pg/mL dosáhl přesnosti 105,7 % a preciznosti 15,0 % RSD. Intraday i interday preciznost a přesnost byly v rámci ±15 % (LQC, MQC, HQC) a ±20 % (LLOQ). Průměrná absolutní obnova činila přibližně 50 % s RSD < 15 %. Matricový efekt se pohyboval mezi 0,87 a 0,97 s RSD < 8,5 %. Nebyl zaznamenán žádný carryover po nejsilnějších standardech.

Přínosy a praktické využití metody

• Vysoká citlivost umožňuje stanovení sub-picogramových koncentrací
• Jednoduchá jednorázová SPE extrakce zvyšuje průchod vzorků
• Reliabilní výkon vhodný pro farmakokinetické a bioekvivalenční studie
• Reprodukovatelné výsledky napříč různými plazmatickými maticemi

Budoucí trendy a možnosti využití

Metoda může být dále adaptována pro analýzu příbuzných kortikosteroidů a dalších léčiv v biologických maticích. Integrace plně automatizovaných SPE systémů a vysokoprůtokové hmotnostní spektrometrie může zlepšit kapacitu a reprodukovatelnost. Rozšíření metody do nižších koncentrací pod 0,50 pg/mL nebo kombinace se screeningovými postupy poskytne širší využití v preklinickém i klinickém výzkumu.

Závěr

Vyvinutá LC-MS/MS metoda na systému Shimadzu LCMS-8060NX poskytuje robustní, citlivý a selektivní přístup k kvantitativnímu stanovení mometasonu furoátu v lidské plazmě. Validace dle mezinárodních směrnic potvrdila její spolehlivost a vhodnost pro farmakokinetické a bioekvivalenční studie.

Reference

• Medscape. Elocon (mometasone). Dostupné z reference.medscape.com/drug/elocon-mometasone-topical-343513.
• Daley-Yates PT. Inhaled Corticosteroids: Potency, Dose Equivalence and Therapeutic Index. Br J Clin Pharmacol. 2015;80:372–380. doi:10.1111/bcp.12637.