Quantification of Potential Genotoxic Impurities in Amlodipine Besylate Using an Agilent GC/Q-TOF System

Význam tématu

Analýza potenciálně genotoxických nečistot v léčivých přípravcích je klíčová pro zajištění bezpečnosti pacientů a dodržení regulačních požadavků. Stopové sloučeniny jako methylbenzensulfonát a ethylbenzensulfonát se mohou vytvářet během syntézy či krystalizace a představují riziko mutagenního či karcinogenního účinku. Nutnost citlivých a selektivních analytických postupů umožňuje jejich spolehlivou detekci a kvantifikaci na úrovni jednotek ng/ml.

Cíle a přehled studie

Cílem aplikace bylo vyvinout a validovat metodu pro stanovení methylbenzensulfonátu (MBS) a ethylbenzensulfonátu (EBS) v tabletách amlodipin besylátu. Využito bylo spojení plynové chromatografie a časově-propínacího hmotnostního spektrometru (GC/Q-TOF) Agilent pro zajištění vysoké hmotnostní přesnosti, rozlišení a citlivosti bez chemické derivatizace.

Použitá instrumentace

• GC Agilent 7890A s multimode inlet a autosampler Agilent 7693A
• Kolona Agilent J&W DB-5ms 30 m × 250 µm, 0,25 µm
• MS Agilent 7200A Q-TOF, EI ionizace, zdroj 230 °C
• Software MassHunter GC/MS Acquisition, Qualitative Analysis, Quantitative Analysis, MSC a NIST 2014 Search

Použitá metodika

• Příprava standardních roztoků MBS a EBS v acetonitrilu, kalibrace v rozmezí 20–5000 ng/ml (MBS) a 50–5000 ng/ml (EBS)
• Degradace tablet amlodipinu při 70 °C, extrakce acetonitril–methanol 1:1, centrifugace a filtrace
• GC podmínky: splitless injekce 2 µl, temperační program 60–250 °C
• MS: nativní MS a MS/MS, akvizice 5 spekter/s, m/z 50–600, bez interního referencování
• Data vyhodnocena s extrakcí iontů ±10 ppm pro maximální selektivitu

Hlavní výsledky a diskuse

• Úspěšné rozlišení MBS a EBS na kolóně DB-5ms v 25 min metodě s retencíní RSD <0,2 % a plošnou RSD <5 %
• LOD 10 ng/ml (MBS), 20 ng/ml (EBS); LOQ 20 ng/ml a 50 ng/ml
• Lineární oblast s korelačním koeficientem >0,99, použit model lineární 1/x
• Recovery test 0,05 % spikovaného standardu prokázal návratnost 100±13 %
• Selektivita potvrzena extrakcí iontů ±10 ppm s minimem šumu
• Hmotnostní chyba <4 ppm pro molekulární ionty i fragmenty
• MSC software úspěšně přiřadil substruktury fragmentům a objasnil mechanismus štěpení
• V degradovaných vzorcích naměřeno 344 ng/ml MBS a 3687 ng/ml EBS

Přínosy a praktické využití metody

Metoda nabízí vysokou citlivost a selektivitu bez nutnosti derivatizace. Umožňuje přesnou identifikaci a kvantifikaci genotoxických nečistot v lékových formách a je vhodná pro rutinní QC laboratoře i vývoj farmaceutických procesů.

Budoucí trendy a možnosti využití

• Využití datově závislé akvizice pro více nečistot simultánně
• Automatizace interpretace fragmentačních dat pomocí umělé inteligence
• Rozšíření metodiky na další typy genotoxických nečistot a přípravků
• Online monitoring syntéz a procesů pro včasné odhalení nežádoucích reakcí

Závěr

Vyvinutá GC/Q-TOF metoda pro stanovení methylbenzensulfonátu a ethylbenzensulfonátu v amlodipin besylátu prokázala vysokou citlivost, selektivitu, přesnost a reprodukovatelnost. Metoda splňuje farmaceutické standardy a umožňuje spolehlivou detekci genotoxických nečistot bez derivatizace.

Reference

• Rao MS et al Der Pharmacia Lettre 2014 6 47–55
• IARC Monographs Carcinogenic Risks to Humans ethyl methane sulphonate 7 1974 245