Determination of nitrite impurity in dalteparin sodium using ion chromatography

Význam tématu

Ion chromatografie s elektrochemickou detekcí (IC-ED) představuje citlivou a selektivní metodu pro stanovení nitritu v léčivých látkách. Její význam spočívá v zajištění kvality a bezpečnosti biofarmaceutik, jako je dalteparin sodium, kde přítomnost nitroskupiny musí být přísně kontrolována podle farmakopejních monografií.

Cíle a přehled studie

Cílem aplikace bylo ověřit postup monografie USP Dalteparin Sodium pro stanovení nitritové nečistoty pomocí kolonové chromatografie Dionex IonPac AS15 v kombinaci s elektrochemickou detekcí. Studie hodnotila separaci, linearitu, detekční limity, přesnost a robustnost metody a porovnala výsledek naměřeného obsahu nitritu se stanoveným limitem 5 ppm.

Použitá instrumentace

• Dionex ICS-5000+ HPIC systém s DP pumpou, DC detektorem a autosamplerem AS-AP
• Elektrochemická detekční cely s glassy carbon pracovní elektrodou a Ag/AgCl referenční elektrodou
• Dionex IonPac AS15 analytická kolona (3 × 150 mm)
• Chromeleon CDS software verze 7.2.9

Použitá metodika

Eluent tvořil roztok octanu sodného (8,2 g/L) upravený na pH 4,3 kyselinou fosforečnou, přefiltrovaný 0,2 µm nylonovým filtrem. Průtok činil 0,5 mL/min, kolona byla temperována na 30 °C, objem injekce 25 µL, autosampler 5 °C. Detekce probíhala amperometricky při potenciálu 1 V, detekční cele 30 °C.

Standardy se připravily ředěním zásobního roztoku nitritu (50 mg/L) na kalibrační úrovně 2,5 až 25 µg/L. Pro určení LOD a LOQ se využilo měření S/N poměru pro roztok 1 µg/L.

Hlavní výsledky a diskuse

System suitability vykázala počet teor. destiček ≥ 5278 (limit ≥ 4000), faktor špičkovité šířky 0,8–0,95 (limit 0,8–1,2) a RSD plochy špičky 1,7 % (limit < 2 %). Linearita byla výborná s r2 = 0,9998 (limit ≥ 0,995). LOD dosáhlo 0,29 µg/L (72,9 ng/g v prášku), LOQ 0,97 µg/L (243 ng/g). Přesnost metody validovaná metodou standardních přídavků spolehlivě prokázala recovery 96,2–105 %. Robustnost vůči změnám průtoku, koncentrace elučního roztoku i teploty kolony byla potvrzena a faktor asymetrie zůstal v přijatelných mezích.

Stanovení vzorku dalteparin sodium (4 mg/mL) prokázalo obsah nitritu 6,91 µg/L (1,76 ppm), což splňuje USP limit 5 ppm.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda IC-ED na koloně IonPac AS15 bez nutnosti derivatizace nabízí rychlé, citlivé a selektivní stanovení nitritové nečistoty v surovinách a hotových lécích. Je vhodná pro rutinní QA/QC laboratoře i pro farmaceutický výzkum a výrobní kontrolu.

Budoucí trendy a možnosti využití

Další vývoj směřuje k integraci mikrofluidních IC systémů, zdokonalení detekce pomocí vícekanálových elektrochemických cel a automatizaci přípravy vzorků. Kombinace s masovou spektrometrií či UV-detekcí rozšíří aplikace na širší spektrum anorganických i organických nečistot.

Závěr

Ověřená metoda pro stanovení nitritové nečistoty v dalteparin sodium plně vyhovuje požadavkům USP na účinnost, linearitu, citlivost a reprodukovatelnost. Je spolehlivým nástrojem pro monitorování kvality a bezpečnosti farmaceutických produktů.

Reference

1. USP 42/NF 37 Dalteparin Sodium monografie (2019).
2. European Pharmacopeia Dalteparin Sodium monograph (2005).
3. Thermo Scientific Dionex ICS-5000+ Operator’s Manual P/N 065446, 2014.
4. Thermo Scientific Electrochemical Detection User’s Compendium P/N 065340-02, 2013.
5. Thermo Scientific IonPac AS15 Columns Product Manual P/N 031362-10, 2014.
6. USP General Chapter <1225> Validation of Compendial Methods (2019).
7. USP General Chapter <621> Chromatography (2019).
8. Thermo Scientific Dionex ICS-6000 Operator’s Manual P/N 22181-97002, 2018.