Utilizing Gradient Manipulation and 1.8 μm LC Columns for High Resolution Analysis of Complex Natural Products

Význam tématu

Manipulace gradientu je klíčovým nástrojem pro zlepšení rozlišení komplexních směsí přírodních produktů. Umožňuje optimalizovat počet analyzovatelných píků a jejich šířku, což je zásadní ve farmaceutickém výzkumu, QA/QC a průmyslové analytice.

Cíle a přehled studie

Studie se zaměřila na vliv změny parametrů gradientu, délky a velikosti částic kolon, průtoku a teploty na kapacitu píků a rozlišení extraktů z kořene lékořice, zlatobýlu a echinacey pomocí UHPLC.

Použitá instrumentace

• UHPLC Agilent 1290 Infinity
• Kolony ZORBAX RRHD Eclipse Plus C18 2,1×50, 100 a 150 mm, 1,8 µm
• Diodový detektor DAD, signál 280 nm, referenční dráha vypnuta

Použitá metodika

Mobilní fáze A: voda s 0,1 % kyseliny formiové (v/v)
Mobilní fáze B: acetonitril s 0,1 % kyseliny formiové (v/v)
Gradient 10–100 % B, běžné časy 10–30 min, průtok 0,2–0,6 ml/min, teplota 26–60 °C.
Příprava vzorků: 1:100 zředění extraktů ve vodě, filtrace 0,2 µm.

Hlavní výsledky a diskuse

Delší kolony zvýšily kapacitu píků až o 60 %, ale vyžadují vyšší tlak (až 768 bar). Zvýšení průtoku zúžilo pík a zkrátilo dobu analýzy při zachování rozlišení, pokud byl gradient úměrně zkrácen. Prodloužení gradientu o 20 % vedlo ke zlepšení kapacity píků o 20 %. Vyšší teplota snížila viskozitu mobilní fáze, snížila tlak a dále zúžila pík, avšak vliv na selektivitu byl závislý na složení vzorku.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda nabízí vysoké rozlišení a kapacitu pro komplikované přírodní extrakty, kratší dobu analýzy a flexibilitu nastavení parametrů. Je vhodná pro rutinní kontrolu kvality i výzkumné aplikace v oblasti přírodních produktů.

Budoucí trendy a možnosti využití

Další rozvoj směřuje k menším průměrům částic, multidimenzionálním technikám, pokročilým detektorům a automatizovanému řízení metod gradientu za pomoci strojového učení.

Závěr

Gradientní manipulace s UHPLC a 1,8 µm RRHD kolony představuje efektivní cestu ke zvyšování kapacity píků a rozlišení v analýze přírodních produktů a nabízí široké možnosti optimalizace pro různá analytická zadání.

Reference

• Neue U D, Theory of peak capacity in gradient elution, J Chromatogr A 1079 (2005) 153–161
• Henderson JJ W Jr, Berry JJ, Long W, Joseph M, HPLC2009 Application Note, Agilent Technologies