Applications and Use of High Pressure and Ultra High Pressure LC ColumnsLC Column

Význam tématu

Vysokotlaké a ultravysoce tlakové chromatografické sloupce představují v současné analytické chemii klíčový nástroj pro zkrácení doby analýzy a zvýšení separační účinnosti. Nasazení sub-2 µm částic v kombinaci se systémy schopnými pracovat až do 1200 bar dovoluje dosáhnout vyššího počtu theoretických destiček a vylepšené rozlišení, což přímo zvyšuje kvalitu dat a produktivitu laboratoří.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem publikace je představit použití Agilent ZORBAX RRHD sloupců ve spojení se systémem Agilent 1290 Infinity LC pro:

• využití plného rozsahu tlaků až do 1200 bar,
• hodnocení stability a životnosti sloupců při opakovaných injekcích,
• zkoušky rychlých a vysoce rozlišujících separací včetně sub-1 min metod,
• praktické příklady separace derivatizovaných aldehydů a biocidů.

Použitá metodika a instrumentace

Studie využívá:

• Agilent 1290 Infinity LC System schopný provozu do 1200 bar,
• ZORBAX RRHD Eclipse Plus C18 sloupce (2.1 × 50–150 mm, 1.8 µm),
• mobilní fáze na bázi vody/acetonitrilu nebo metanolu dle aplikace,
• hlavní parametry: průtok 0,3–2,3 mL/min, teplota 60 °C, detekce DAD (254 nm–275 nm),
• vyhodnocení zpětného tlaku a počtu destiček před a po 5000 injekcích (QC test).

Hlavní výsledky a diskuse

Test životnosti při 950–1000 bar odhalil minimální pokles destičkového počtu (původně ~21 480, po 5000 injekcích ~21 205).
Porovnání délek sloupců 50, 100 a 150 mm ukázalo výrazný nárůst rozlišovací schopnosti (Rs3,2 rostlo z ~5,6 na ~12) při ceně vyššího tlaku až 960 bar.
Spojením dvou 100 mm sloupců (celkem 250 mm) bylo dosaženo ~ Rs 4,9 a počtu destiček až 49 200.
Ukázky separací DNPH-derivátů aldehydů prokazují rychlé baseline rozlišení až 13 sloučenin do 9 min při tlaku >1080 bar.
Sub-1 min analýza biocidů demonstrovala robustnost metody na 2.1×50 mm kolonce při tlaku ~975 bar.

Přínosy a praktické využití metody

Nasazení ultravysoce tlakových sloupců přináší:

• výrazné zkrácení doby analýzy až na desítky sekund,
• zvýšení rozlišení pro složité směsi,
• stabilní výkon při dlouhodobém provozu (tisíce injekcí),
• široké uplatnění v QA/QC, farmaceutickém výzkumu, environmentální analytice.

Budoucí trendy a možnosti využití

Další vývoj se očekává v oblasti:

• dalšího zvyšování pracovní tlakovosti nad 1200 bar,
• integrovaných UHPLC-MS řešení pro zvýšenou selektivitu a senzitivitu,
• automatizovaných multi-dimenzionálních aplikací,
• miniaturizace a spotřeby mobilní fáze pro šetrnější provoz.

Závěr

Agilent ZORBAX RRHD sloupce ve spojení se systémem 1290 Infinity LC dokazují vysokou odolnost i při extrémních tlacích až 1200 bar a umožňují provádět rychlé, vysoce účinné separace s vynikajícím rozlišením. Tyto vlastnosti otevírají nové možnosti v analytické praxi a přispívají k dalšímu zvyšování produktivity laboratoří.

Reference

• Link J., Brooks A., Henderson J.W. Jr, Long W., Martone N., Martosella J., Permar B. Applications and Use of High Pressure and Ultra High Pressure LC Columns. HPLC2009.