SampliQ OPT Solid Phase Extraction Sorbent in the Cleanup of Flavonoids in Ginkgo Biloba by HPLC-DAD

Význam tématu

Flavonoidy z Ginkgo biloba jsou významnými přírodními polyfenoly s prokázanými antioxidačními a kardioprotektivními účinky. Jejich spolehlivá detekce v komplexních matricích současných farmaceutických preparátů a doplňků stravy vyžaduje citlivé, selektivní a reprodukovatelné metody. Solid‐phase extraction (SPE) nabízí efektivní cestu k odstranění rušivých složek a koncentraci analytů před chromatografickou analýzou.

Cíle a přehled studie

• Optimalizovat SPE s polymerovými sorbenty SampliQ OPT pro izolaci tří flavonoidů (kvercetin, kaempferol, isorhamnetin) z prášků Ginkgo biloba.
• Vyvinout rychlou a robustní HPLC‐DAD metodu umožňující separaci a kvantifikaci vepharmaceutických přípravcích.
• Ověřit reprodukovatelnost, návratnost, limity detekce a kvantifikace a linearitu metody.
• Aplikovat postup na komerční vzorky tablet a listů Ginkgo biloba.

Použitá metodika a instrumentace

Upon sample preparation tablets were ground and extracted refluxem v methanolu s kyselinou chlorovodíkovou, následně filtrováno a naředěno vodou s úpravou pH. SPE postup zahrnoval kondicionaci kartridže, naložení vzorku, dvoustupňové promytí vodnými a organicko-solnými fázemi a eluční krok methanolem.

Použitá instrumentace

• HPLC Agilent 1200 Series s detektorem DAD
• Kolona ZORBAX Eclipse Plus C18 (4,6×75 mm, 3,5 μm)
• SampliQ OPT SPE kartridže (30 mg)
• Membránový filtr PVDF 0,45 μm
• Milli-Q systém pro úpravu vody a pH metr Jenway

Hlavní výsledky a diskuse

• Optimální mobilní fáze: 0,5% fosforečná kyselina/methanol (40:60, obj.) při průtoku 1 ml/min, izokraticky, separace do 4 minut.
• Špičky tří flavonoidů byly dobře symetrické bez interferencí po SPE čištění.
• Průměrné návratnosti: kvercetin 80–92%, kaempferol 83–94%, isorhamnetin 75–102% (n=6), %RSD <5%.
• Lineární oblast až do 120 μg/ml (kvercetin, kaempferol) a 150 μg/ml (isorhamnetin) s koeficienty r2 >0,999.
• Mez detekce: 0,57–0,88 μg/ml, mez kvantifikace: 1,91–2,55 μg/ml.
• Analýza vzorků tablet a listů odhalila obsah flavonoidů: kvercetin 12–26 μg/ml, kaempferol 10–19 μg/ml, isorhamnetin ~9 μg/ml v tabletách.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda kombinuje rychlé SPE čištění s efektivní HPLC separací vhodnou pro rutinní kontrolu kvality farmaceutických a potravinových výrobků. Výrazně snižuje matrixové rušení a spotřebu organických rozpouštědel.

Budoucí trendy a možnosti využití

• Rozšíření na další skupiny flavonoidů a fytochromatografické markery.
• Integrace on‐line SPE‐HPLC pro zkrácení doby analýzy.
• Použití molecularly imprinted polymer a imunoafinityálních sorbentů pro cílenou extrakci.
• Miniaturizace a zelená chemie v souladu s principy udržitelného výzkumu.

Závěr

Vyvinutá metoda SPE na sorbentech SampliQ OPT ve spojení s krátkou HPLC‐DAD analýzou poskytuje rychlé, přesné a opakovatelné stanovení flavonoidů v komplexních matricích Ginkgo biloba. Dosahuje vysokých návratností, nízkých detekčních mezí a je vhodná pro běžné laboratorní i průmyslové aplikace.

Reference

1. Van Beek TA, Montoro P. J Chrom A. 2009;1216:2002–2032.
2. Wang Y, Cao J, Weng JH, Zeng S. J Pharm Biomed Anal. 2005;39:328–333.
3. Chiu KL et al. J Supercrit Fluids. 2002;24:77–87.
4. Dubber MJ, Kanfer I. J Pharm Pharm Sci. 2004;7(3):303–309.
5. Watson DG, Oliveira EJ. J Chrom B. 1999;723:203–210.
6. Mmualefe L et al. Microchem J. 2009;91:239–244.
7. Melo LFC et al. J Chrom A. 2004;1032:51–58.
8. Landis MS. J Pharm Biomed Anal. 2007;44:1029–1039.
9. Bielicka-Daszkiewicz K et al. Chemosphere. 2006;62:890–898.
10. Hennion MC. J Chrom A. 1999;856:3–54.
11. Deng F, Zito SW. J Chrom A. 2003;986:121–127.
12. Alabdalla MA. J Clin Forensic Med. 2005;12:310–315.