Analysis of traditional Chinese medicines with the Agilent 1200 Series evaporative light scattering detector

Význam tématu

Detekce látek bez chromoforu v tradičních čínských lécích (TCM) představuje v analytické chemii významnou výzvu. Konvenční UV detektory nejsou schopny tyto sloučeniny spolehlivě zachytit, což komplikuje kontrolu kvality a kvantifikaci biologicky účinných složek. Použití ELSD (evaporative light scattering detector) na platformě Agilent 1200 Series nabízí univerzální detekci všech sloučenin méně těkavých než mobilní fáze, čímž usnadňuje analýzu komplexních přírodních extraktů.

Cíle a přehled studie

Studie si klade za cíl demonstrovat možnosti ELSD při analýze dvou klíčových skupin sloučenin v TCM: flavonoidů z Ginkgo biloba L. a saponinů (astragalosidů) z Radix Astragali (Huangqi). Aplikace ukazují, jak lze pomocí gradientní a izokratické HPLC metod dosáhnout kvalitního rozlišení, detekce a kvantifikace těchto netěkavých látek bez nutnosti derivatizace.

Použitá metodika a instrumentace

Metody byly vyvinuty na přístrojové sestavě Agilent 1200 Series Rapid Resolution LC vybavené:

• binární pumpou SL s vakuovým odplyňovačem
• vysokoúčinným autosamplerem SL
• termostatovanou kolonkou SL (40 °C)
• diode array detektorem SL (2 µL, 3 mm)
• ELSD s teplotou 40 °C, tlakem 3,5 bar, gainem 7

Řešení fází a gradientní programy:

• Ginkgo: 0–20 min 12→30 % THF/methanol, průtok 0,7 mL/min
• Astragali: 0–30 min 20→100 % acetonitril, průtok 0,7 mL/min

Vzorky se připravovaly vážením (1 g), extrakcí v methanolu, ultrazvukem a filtrací.

Hlavní výsledky a diskuse

Chromatogramy Ginkgo flavonoidů ukázaly u ELSD výrazně vyšší citlivost oproti UV (210 nm, 254 nm), kdy některé sloučeniny vůbec nereagují v UV. Bylo dosaženo baseline stabilního rozlišení čtyř hlavních flavonoidů a dalších netěkavých komponent. V případě Astragali došlo k oddělení astragalosidu od ostatních složek rostlinného extraktu. Kalibrační křivky (lineární oblast) vykázaly koeficienty determinace > 0,998; detekční limity se pohybovaly v řádu 12–30 ng pro jednotlivé sloučeniny.

Přínosy a praktické využití metody

ELSD na Agilent 1200 Series přináší:

• universální detekci netěkavých látek bez derivatizace
• stabilní základní čáru při gradientních separacích
• vysokou citlivost a reprodukovatelnost kvantifikace
• splnění požadavků Čínské farmakopeje (2005)

Metoda je vhodná pro rutinní QC oddělení v TCM i farmaceutickém průmyslu.

Budoucí trendy a možnosti využití

Další vývoj se zaměří na lepší pochopení závislosti citlivosti ELSD na velikosti par­tikulí a mobilní fázi, optimalizaci lineárního rozsahu a integraci s dalšími detektory (DAD, MS). Očekává se rozšíření aplikací do analýzy potravinových doplňků, biologických tekutin a nových komplexních směsí.

Závěr

Agilent 1200 Series ELSD představuje efektivní nástroj pro analýzu netěkavých komponent tradičních čínských léků. Umožňuje spolehlivou detekci, separaci i kvantifikaci flavonoidů a saponinů bez nutnosti derivatizace a splňuje požadavky farmakopejních metod QC.

Reference

1. Pharmacopoeia of the People’s Republic of China, 2005.
2. Qi L.-W. et al., Quality evaluation of Radix Astragali… J. Chromatogr. A 1134 (2006) 162–169.
3. Wang Q. et al., Progresses on Evaporative Light-scattering Detection, J. Instrumental Analysis 25 (2006) 126–132.
4. Trones R. et al., Modified laser light-scattering detector… J. Chromatogr. A 814 (1998) 55–61.
5. Mathews B.T. et al., Improving Quantitative measurements… Chromatographia 60 (2004) 625–633.
6. Oppenheimer E. et al., Examination of the concentration response Evaporative Light Scattering Mass Detector, J. Chromatogr. 323 (1985) 297–304.
7. Dreux M. et al., The Evaporative Light Scattering Detector–a Universal Instrument for Non-Volatile Solutes in LC and SFC, LC-GC Int. (1996).
8. Su H. et al., Determination of Jujubaside A in Ziziphi Spinosae Mixture by HPLC-ELSD, J. Modern Food and Pharmaceuticals 17(6) (2007) 35–37.