Improvement Upon a Multi-Residue Method for Nitrosamine Analysis in Losartan Drug Product Using an Enhanced LC/MS/MS System

Význam tématu

Nitrosaminy patří mezi pravděpodobné karcinogeny a jsou klasifikovány jako potenciálně genotoxické nečistoty. Ve farmaceutickém průmyslu se vyskytují v trace množství jako vedlejší produkty syntézy, zejména u blokátorů angiotenzinových receptorů (ARB) jako je losartan. Regulátoři stanovili přísné limity pro celkové denní dávky (např. 96 ng/kg), což vyžaduje vysoce citlivé a spolehlivé analytické metody pro kontrolu kvality finálních léčivých produktů.

Cíle a přehled studie

Cílem studie bylo zdokonalit existující multi-reziduální LC/MS/MS metodu pro analýzu osmi nitrosaminů v tabletách losartanu. Metoda je založena na novém systému s kapalinovou chromatografií Agilent Infinity II Bio LC spojenou s trojčtvercovým hmotnostním spektrometrem Agilent 6495 a APCI zdrojem. Studie demonstruje nízké detekční limity a široký kvantifikační rozsah pro sledované sloučeniny.

Použitá instrumentace

• Agilent 1290 Infinity II Bio LC se sekvencí modulů: vysokotlaké pumpy, termostatovaný multisampler a multicolumn termostat
• Agilent 6495 trojčtvercový MS s APCI ionizačním zdrojem
• Software Agilent MassHunter Workstation 12.0

Použitá metodika

Vzorky se připravovaly rozpuštěním tablet losartanu v metanol-voda (1:1), sonikací, následnou centrifugací a ředěním ředidlem. Nitrosaminové standardy byly připraveny v devíti koncentracích od 0,0125 do 10 ng/mL v čistém ředidle a následně přidány do matrice API v rozsahu 0,05–1 ng/mL. Chromatografie probíhala na kolóně C18 (Poroshell 120 EC-C18, 3,0×150 mm, 2,7 μm) s gradientem metanolu a vody s kyselinou mravenčí při průtoku 0,5 mL/min a teplotě 40 °C. MS/MS měření využívalo režim MRM s časovými segmenty, nastavením detekčních parametrů APCI (teplota, proud, napětí) a optimalizovanými prekurzor-produkt ionty pro každou sloučeninu.

Hlavní výsledky a diskuse

Kalibrační křivky pro všechny analyty byly lineární v rozsahu 0,0012–10 ng/mL s korelačními koeficienty R2 > 0,997. LLOQ menší než 0,01 ng/mL bylo dosaženo u většiny nitrosaminů. V matici losartanového extraktu bylo možné s vysokou přesností (S/N > 10) kvantifikovat všechny sloučeniny již při 0,03 ng/mL. Rozdílné retenční časy a výsečové fragmenty umožnily selektivní detekci v komplexním farmaceutickém vzorku.

Přínosy a praktické využití metody

• Zajištění souladu s regulatorními limity nitrosaminů ve finálních léčivých formách
• Vysoká citlivost a robustnost vhodná pro rutinní QC laboratoře
• Možnost adaptace na další ARB a jiné lékové formy

Budoucí trendy a možnosti využití

• Automatizace přípravy vzorků a integrace s online SPE pro zvýšení průchodnosti
• Rozšíření analytického panelu o další genotoxické nečistoty
• Použití alternativních ionizačních technik (APPI, ESI ve speciálních podmínkách) a vysokého rozlišení MS pro potvrzování identity
• Metody ‘‘green chemistry‘‘ pro minimalizaci organických rozpouštědel

Závěr

Použití Agilent 6495 LC/TQ se systémem Infinity II Bio LC a APCI zdrojem významně zvýšilo citlivost a spolehlivost detekce nitrosaminů v losartanu. Metoda splňuje přísné limity stanovené regulačními orgány a je plně použitelná pro rutinní kontrolu kvality farmaceutických produktů.

Reference

1. U.S. Food and Drug Administration. FDA Updates and Press Announcements on Angiotensin II Receptor Blocker (ARB) Recalls (Valsartan, Losartan, and Irbesartan). Last revised March 2023.
2. Center for Drug Evaluation and Research, U.S. Food and Drug Administration. Control of Nitrosamine Impurities in Human Drugs: Guidance for Industry. Last revised February 2021.
3. Committee for Medicinal Products for Human Use, European Medicines Agency. Procedure under Article 5(3) of Regulation EC (No) 726/2004. Procedure number: EMEA/H/A-5(3)/1490.