Agilent Cary Eclipse Fluorescence Spectrophotometer

Význam tématu

Fluorescenční spektrofotometrie je klíčová technika v analytické chemii pro studium biomolekul, materiálů a biologických procesů. Přístroj Cary Eclipse s xenonovou výbojkou nabízí vysokou citlivost, široký rozsah vlnových délek a rychlou akumulaci dat bez rizika fotoběžení.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem textu je představit hlavní výhody a aplikace přístroje Agilent Cary Eclipse. Popisuje se zde řada případových studií z oblasti biochemie, farmakologie i materiálové vědy, kde Cary Eclipse umožnil efektivní měření fluorescenčních a luminiscenčních signálů.

Použitá metodika a instrumentace

Instrumentace:

• Fluorescenční spektrofotometr Cary Eclipse s xenonovou flash lampou
• Optický design s ochranou proti fotoběžení a odolností vůči pokojovému osvětlení
• Příslušenství: rychlý filtr (fast filter), Peltierova buňka pro kontrolu teploty, držák práškových vzorků, mikrovláknová optika, mikrodestičkový čtečka
• Software Cary WinFLR s aplikací Ratio pro sledování intracelulárních iontů

Hlavní výsledky a diskuse

1. Aplikace v biochemii a buněčných studiích:

• Charakterizace bioznaček a kvantový výtěžek nanokrystalů
• Analýza GPCR oligomerizace a rychlé kinetiky receptorových procesů
• Detekce bakteriálních kmenů pomocí fluorescenčních sond bez nutnosti zahřívání
• Sledování mobilizace vápníkových iontů v buňkách s časovým rozlišením 50 ms

2. Analýza stability proteinů a léčiv:

• Fluorescenční měření životnosti emisí lanthanoidových chelátů
• Sledování strukturálních změn lyofilizovaných proteinů v pevném stavu
• Stanovení teploty tání (Tm) pomocí derivativní křivky pro fluorescenční sondy

Přínosy a praktické využití metody

• Univerzální použití pro živé buňky, biomolekuly i materiálové vzorky
• Vysoká rychlost měření – kompletní spektrum za méně než 3 sekundy, kinetika až 80 bodů/s
• Extrémně dlouhá životnost lampy (>10 let) a nízké náklady na provoz
• Možnost otevřené komory pro manipulaci se vzorky i v průběhu měření

Budoucí trendy a možnosti využití

Zavedení pokročilé automatizace a integrace s umělou inteligencí pro analýzu spekter, rozšíření multimodálních detekčních přístupů, vývoj miniaturizovaných modulů pro in situ měření v mikrofluidních zařízeních a implementace do high-throughput screeningových platforem.

Závěr

Agilent Cary Eclipse představuje robustní a flexibilní nástroj pro široké spektrum fluorescenčních a luminiscenčních aplikací. Díky propracované optice, široké nabídce příslušenství a výkonnému softwaru poskytuje spolehlivá data pro výzkum i průmyslovou praxi.

Reference

• Byrne P. et al. Proc. of SPIE Vol. 5824, 2005, doi:10.1117/12.604814
• Pellissier L. et al. J. Biol. Chem. 286(12), 2011, doi:10.1074/jbc.M110.201939
• Aguirre M. et al. J. Vis. Exp. 63, 2012, doi:10.3791/3961
• Petrucci A. et al. J. Pharmacol. Exp. Ther. 336, 2011, doi:10.1124/jpet.110.174821
• Ramachandar S. et al. Anal. Biochem. 376, 2008, doi:10.1016/j.ab.2008.02.008
• van Lieshout L. et al. Appl. Biochem. Biotechnol. 167, 2012, doi:10.1007/s12010-012-9674-z