Screening of Nitrosamine Impurities in Drug Products and Drug Substances Using Agilent GC/MS/MS Instrumentation

Význam tématu

Stopové nitrosaminy v léčivých přípravcích představují potenciální karcinogenní riziko a podléhají přísným regulačním požadavkům FDA a EMA. Screening a kvantifikace těchto látek jsou klíčové pro zajištění bezpečnosti a kvality léčiv.

Cíle a přehled studie / článku

Studie si kladla za cíl vyvinout a validovat generickou GC/MS/MS metodu pro screening třinácti běžných nitrosaminů (NDMA, NDEA, NMOR, NMEA, NPYR, NPIP, NEIPA, NDIPA, NDPA, NDBA, NMPA, NMPEA, NDPh) v organických a vodných matricích léčivých látek a přípravků. Ověřila citlivost, linearitu, přesnost a opakovatelnost metody.

Použitá metodika a instrumentace

• Příprava vzorku: Disperze 500–1000 mg vzorku do methylenchloridu nebo extrakce v 1M NaOH a kapalně-kapalná extrakce do 2 ml MeCl2.
• Interní standardy: Deuterované slabě značené nitrosaminy NDMA-d6, NDEA-d10, NDIPA-d14 a NDBA-d18.
• Kalibrace: Standardní roztoky 0,01–6 ng/ml (1–60 ppb) připravené v MeCl2, rozsahy adaptované u některých sloučenin na 1–40 nebo 2–60 ppb.
• Chromatografie: Agilent 8890 GC, splitless injekce 1 µl, kolona J&W DB-1701 (14 % cyanopropylfenyl/86 % dimethylpolysiloxan), program teplot od 40 až do 280.
• Detekce GC/MS/MS: Agilent 7010B s vysokovýkonným zdrojem HES, elektronová ionizace 70 eV, režim MRM s dusíkem jako kolizním plynem a heliem jako quench plynem.
• Automatický vzorkovač: Agilent 7693A.

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda dosáhla vynikající chromatografické selektivity pro všechny analyty bez vzájemného rušení. Lineární odezva vykazovala korelační koeficienty r ≥ 0,98. Limity detekce (LOD) se pohybovaly v rozmezí 0,05–2 ppb, limity kvantifikace (LOQ) v rozmezí 1–10 ppb. Obnovení spikovaných vzorků dosáhlo 70–130 % s RSD ≤ 20 % při 30 ppb. Opakovatelnost byla lepší než 7 % RSD pro všechny sloučeniny.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda umožňuje rychlý a spolehlivý předběžný screening nitrosaminů v různých typech léčivých forem. Splňuje regulatorní požadavky pro počáteční hodnocení rizika a usnadňuje rozhodnutí o nutnosti následných kvantitativních potvrzujících analýz. Je vhodná pro QC laboratoře a farmaceutický výzkum.

Budoucí trendy a možnosti využití

• Rozšíření sledované škály nitrosaminů a dalších toxických nečistot.
• Integrace plně automatizovaných vzorkovačů a online monitorovacích systémů.
• Hyphenované techniky kombinující LC/MS/MS a GC/MS/MS pro vyšší citlivost a selektivitu.
• Aplikace v reálném čase v kontinuálních výrobních procesech pro online kontroly kvality.

Závěr

Navržená GC/MS/MS metoda na platformě Agilent 8890–7010B pro screening 13 nitrosaminů je vysoce citlivá, přesná a reprodukovatelná. Umožňuje spolehlivou detekci a kvantifikaci stopových látek a podporuje dodržení mezinárodních regulačních standardů.

Reference

• European Medicines Agency, EMA/369136/2020/H/A-5(3)/1490, Assessment report on nitrosamine impurities, 2020
• European Medicines Agency, EMA/409815/2020, Questions and Answers for marketing authorisation holders, 2020
• U.S. Food and Drug Administration, Control of Nitrosamine Impurities in Human Drugs, Guidance document