Quantification of Hepcidin in Plasma Using the Immundiagnostik Hepcidin-25 LC- MS/MS Kit (Ruo) For Clinical Research

Význam tématu

Hepcidin je klíčový peptid regulující metabolismus železa a zajišťuje obranné mechanismy před infekcí. Přesná kvantifikace v plazmě je zásadní pro pochopení patologických stavů spojených s poruchami iron homeostázy a pro vývoj cílených terapií.

Cíle a přehled studie / článku

Článek představuje robustní LC-MS/MS metodu pro kvantifikaci nízkých koncentrací hepcidinu-25 v citrátové plazmě v laboratorním formátu 96-jamkových destiček. Cílem bylo dosáhnout vysoké lineární přesnosti, citlivosti a minimálních ztrát adsorpcí.

Použitá metodika

Metoda kombinuje redukci disulfidových můstků, SPE na OASIS HLB µElution destičce a chromatografii na CSH C18 kolóně. Analyzované vzorky jsou doplněny stabilně značeným interním standardem a připraveny pomocí spotřebního materiálu s nízkou vazebností k povrchu.

Použitá instrumentace

• UPLC systém ACQUITY I-Class s modulem FTN a termostatovanou kolónou
• Tandemový kvadrupólový hmotnostní spektrometr Xevo TQ-S micro v režimu ESI+ a MRM
• SPE destička OASIS HLB µElution a sběrná destička QuanRecovery
• Sørensen Low Binding Tips a LowBind tuby

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda prokázala v rozsahu 3,5–132,7 ng/mL lineární závislost s R²>0,99 pro 4+ i 5+ ionty a přesnost v rozmezí 95–98 % s CV<10 %. Meze stanovení (LOQ) byly 1,4 ng/mL (4+) a 1,8 ng/mL (5+). Porovnání se standardním postupem potvrdilo shodu výsledků (průměrné odchylky -0,4 a 0,03).

Přínosy a praktické využití metody

• Jednoduchá příprava vzorku pomocí komerčního kitu RUO
• Vysoká citlivost a reprodukovatelnost i při nízkých hladinách
• Vhodné pro klinicko-výzkumné studie monitorující metabolismus železa

Budoucí trendy a možnosti využití

S rostoucím zájmem o personalizovanou medicínu umožní rozšíření s nižšími kalibrátory a integrace automatizovaných pracovních postupů širší aplikace v diagnostice anemií a chronických zánětlivých onemocnění.

Závěr

Vyvinutá LC-MS/MS metoda pro hepcidin-25 umožňuje spolehlivou kvantifikaci s vynikající přesností, linearitou a citlivostí, a poskytuje robustní nástroj pro klinický výzkum regulace železa.

Reference

• Krause A., et al. Identification of hepcidin as a liver-derived peptide with antimicrobial activity. Proc Natl Acad Sci U S A. 2001;98(26):15233-15238.
• Nemeth E., et al. Hepcidin, the iron regulatory hormone. J Clin Invest. 2004;113(9):1254-1261.
• Ganz T. Hepcidin and iron homeostasis: updates and challenges. Front Physiol. 2019;10:1294.
• Vokurka M., et al. Clinical implications of hepcidin quantification. Haematologica. 2019;104(7):1174-1184.