LC/MS/MS Method Package for Cell Culture Profiling Ver. 3 for LabSolutions LCMS

Význam tématu

Profilování metabolit v buněčných kulturách je klíčové pro pochopení buněčného metabolismu a optimalizaci biotechnologických procesů. Rychlá a komplexní analýza umožňuje sledovat dynamiku metabolitů během kultivace a podporuje vývoj bioprocesů a výzkum monoklonálních protilátek.

Cíle a přehled studie / článku

Tento balíček metod Verze 3 pro LabSolutions LCMS umožňuje simultánní kvantifikaci 144 sloučenin, včetně aminokyselin, vitaminů, cukrů a metabolitů TCA cyklu, v jednom analytickém běhu trvajícím méně než 20 minut. Metoda vyžaduje minimální vývoj a optimalizaci.

Použitá metodika a instrumentace

Metodika zahrnuje:

• Extrahování metabolitů z buněčných výluhů a supernatantu kultivačního média
• Kvantitativní LC/MS/MS analýzu s optimalizovanou chromatografií a hmotnostní spektrometrií
• Software Multi-omics Analysis Package pro pokročilou datovou analýzu

Použitá instrumentace:

• Shimadzu LCMS s LabSolutions LCMS Ver. 5.113
• LabSolutions Insight Ver. 3.8 SP3
• Triple-quadrupole hmotnostní spektrometr

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda prokázala schopnost současně analyzovat intracelulární i extracelulární metabolity jedním během. Bylo detekováno 144 cílových sloučenin napříč různými třídami metabolitů. Časová sledování ukázala dynamiku jejich koncentrací během kultivace. Integrace multivariačních analýz, včetně PCA a hierarchického shlukování, usnadnila interpretaci komplexních dat.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda přináší:

• Vysokou propustnost analýzy s krátkým časem běhu
• Široké pokrytí metabolitů relevantních pro bioprocesy a buňěčnou biochemii
• Snadnou vizualizaci časových změn koncentrací

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se rozvoj integrace s dalšími omickými daty, využití umělé inteligence pro interpretaci výsledků a rozšíření aplikací v personalizované medicíně a bioprocesovém inženýrství. Dále se předpokládá adaptace metodiky na nové typy buněčných kultur.

Závěr

Popsaná LC/MS/MS metoda Verze 3 nabízí rychlý, robustní a vysoce citlivý nástroj pro komplexní profilování metabolitů v buněčných kulturách. Je vhodná pro výzkum i průmyslové aplikace zaměřené na optimalizaci biotechnologických procesů.

Reference

1. Shimadzu Application News C209, 2022 Evaluation of Undifferentiated State of Human iPS Cells Using C2MAP Cell Culture Media Analysis Platform