LC-MS/MS method for the quantification of 10 nitrosamine impurities in metformin

Význam tématu

Analýza nitrosaminů v léčivu metformin je z hlediska zdravotní bezpečnosti klíčová. Tato nežádoucí složka může vznikat při syntéze nebo skladování a její přítomnost i v nízkých koncentracích podléhá přísným regulačním limitům. Přesné kvantitativní stanovení nitrosaminů pomáhá farmaceutickým firmám splnit požadavky úřadů a ochránit pacienty před rizikem karcinogenní expozice.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem prezentované studie bylo navrhnout a ověřit LC-MS/MS metodu pro současné kvantitativní stanovení deseti nitrosaminových nečistot v metforminu. Metoda navazuje na předchozí postupy FDA pro osm sloučenin a rozšiřuje je o dva další analyty (NMOR, NPIP). Validované parametry zahrnují linearitu, limity detekce a kvantifikace, přesnost i opakovatelnost.

Použitá metodika a instrumentace

Reverzněfázová chromatografie na kolóně Acclaim 120 C18 (4,6×150 mm, 3 µm) při teplotě 40 °C a gradientním elučním režimu s mobilními fázemi 0,1 % kyseliny mravenčí ve vodě a v methanolu. Detekce probíhala na triple-quadrupole TSQ Quantis s ionizací APCI v pozitivním módu a selektivním monitorováním reakcí (SRM). Systém Vanquish Flex zajišťoval přesné dávkování a stabilní tepelnou kontrolu.

Hlavní výsledky a diskuse

Výsledky ukázaly:

• Lineární kalibrační závislosti s koeficientem determinace r²>0,99 pro všechny analyty.
• Limity detekce LOD 0,2–0,4 ppb a limity kvantifikace LOQ 0,5–1 ppb s poměrem signál šum nad 12.
• System suitability: RSD retenčních časů i ploch pod 5 % a kumulativní RSD ploch pod 6,1 % během 35 hodin nepřetržitého provozu.
• Přesnost stanovení (recovery) v rozsahu 82–118 % při třech úrovních koncentrace splňuje kritéria 80–120 %.
• Specifický rozklad konformerů NMBA a NEIPA, který byl řešen integrační politikou zahrnující obě špičky.

Přínosy a praktické využití metody

Validatední metoda umožňuje spolehlivé sledování deseti nitrosaminů v metforminu v běžných kontrolních laboratořích. Díky vysoké citlivosti a reprodukovatelnosti je vhodná pro rutinní QA/QC, šaržový screening i dlouhodobé stabilitní studie.

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se rozšíření počtu sledovaných nitrosaminů, aplikace vysoce rozlišené hmotnostní spektrometrie (HRMS) pro potvrzovací analýzy, miniaturizace vzorkových příprav a automatizace workflow. Dále bude klíčová integrace principů zelené chemie pro snížení spotřeby rozpouštědel a odpadů.

Závěr

Byla vyvinuta robustní LC-MS/MS metoda pro kvantifikaci deseti nitrosaminů v metforminu s vynikající linearitou, citlivostí i přesností. Splňuje požadavky regulačních norem a poskytuje spolehlivý nástroj pro farmaceutickou praxi.

Reference

1. Liquid Chromatography-High Resolution Mass Spectrometry LC-HRMS Method for the Determination of Six Nitrosamine Impurities in ARB Drugs, USFDA, 21.05.2019
2. Liquid Chromatography-High Resolution Mass Spectrometry LC-HRMS Method for the Determination of NDMA in Ranitidine Drug Substance and Drug Product, USFDA, 13.09.2019
3. Liquid Chromatography-High Resolution Mass Spectrometry LC-HRMS Method for the Determination of NDMA in Metformin Drug Substance and Drug Product, USFDA, 04.02.2020
4. Rigorous Detection of Nitrosamine Contaminants in Metformin Products: Balancing Product Safety and Product Accessibility, USFDA, 03.09.2020
5. Liquid Chromatography-Electrospray Ionization-High Resolution Mass Spectrometry LC-ESI-HRMS Method for the Determination of Nitrosamine Impurities in Metformin Drug Substance and Drug Product, USFDA, 03.06.2020