Clam- SPE on line- UHPLC-MS/MS : Fully automatic, simultaneous and quickly quantification of drugs of abuse in blood, plasma and urine

Význam tématu

Rychlá a automatizovaná analýza omamných látek v biologických matricích je klíčová pro toxikologii, právní medicínu a interní kontroly. Systém s minimálním lidským zásahem zvyšuje reprodukovatelnost výsledků a snižuje riziko kontaminace.

Cíle a přehled studie

Cílem bylo vytvořit plně automatizovanou metodu, kombinující CLAM-2000 s on-line SPE a UHPLC-MS/MS, pro simultánní kvantifikaci 40 derivátů amfetaminu, opiátů, kokainu a 3 kannabinoidů v krvi, plazmě a moči v rámci jednoho běhu o délce 10 minut.

Použitá metodika a instrumentace

Princip: Clam-2000 provádí precipitaci proteinů, filtraci a ředění vzorků nasazených přímo z primárních zkumavek. Následuje on-line SPE na iontovém výměnci a separace na C18 kolonce pomocí UHPLC Nexera XR. Detekce probíhá na tripexnikovém kvadrupólu LCMS-8060 v režimu MRM.
Instrumentace:

• Clam-2000 s on-line SPE (patent WO 2016/098169 A1)
• UHPLC Nexera XR
• LCMS-8060 (triple quadrupole MS/MS)

Hlavní výsledky a diskuse

Kalibrační křivky ve krvi vykazovaly koeficienty determinace >0,99 s LOQ 10 ng/ml pro drogy a 1 ng/ml pro kannabinoidy. Průměrná přesnost se pohybovala mezi 85–115 % a iontové poměry byly stabilní. Opakovatelnost (RSD) nižší než 15 % ve třech matricích pro QC 10 ng/ml (drogy) a 1 ng/ml (kannabinoidy) potvrzuje robustnost metody.
Analýza jednoho vzorku zabere 10 minut včetně proplachu injektoru a kolony, minimalizuje se carry-over a spotřeba elučních rozpouštědel.

Přínosy a praktické využití

• Vysoká propustnost díky automatizaci a krátkému času běhu
• Snížení lidských zásahů minimalizuje chyby a kontaminaci
• Možnost použití jedné kalibrace pro krev, plazmu i moč
• Úspora rozpouštědel a nákladů na pracovní dobu
• Vysoká citlivost a selektivita pro forenzní a klinické aplikace

Budoucí trendy a možnosti využití

Metodu lze rozšířit o analýzu sliny z kolektorů Floqswab® a Quantisal®. Dalšími kroky jsou integrace do high-throughput platforem, rozšíření spektra analyzovaných látek a využití strojového učení pro automatickou kontrolu kvality dat.

Závěr

Vyvinutá plně automatická metoda CLAM-2000 SPE on-line UHPLC-MS/MS poskytuje rychlou, citlivou a reprodukovatelnou kvantifikaci širokého spektra omamných látek v biologických vzorcích a je vhodná pro rutinní forenzní a klinickou toxikologii.