Streamlining workflow from characterization to monitoring of therapeutic oligonucleotides impurities across IPRP-LC-HRAM-MS platforms

Význam tématu

Vývoj a kontrola léčiv založených na chemicky modifikovaných oligonukleotidech vyžaduje citlivé a robustní analytické postupy. Rychlá identifikace a kvantifikace plnohodnotného produktu a jeho nečistot je klíčová v průběhu vývoje, výroby i kontroly kvality, aby se zajistila bezpečnost a účinnost terapeutik.

Cíle a přehled studie / článku

Hlavním cílem studie bylo zavedení komplexního testu systémové výkonnosti (SPET) pro hodnocení metrik LC-MS přístrojů a následná validace metody pro charakterizaci a monitorování syntetických oligonukleotidů a jejich nečistot. Metoda byla vyvinuta na platformě IPRP-LC-HRAM-MS a byla úspěšně převedena mezi třemi přístroji Thermo Scientific Orbitrap Exploris.

Použitá metodika a instrumentace

SPET test využívá směs šesti oligonukleotidů s definovanými metrikami LC (retence, účinnost separace) a MS (hmotnostní odchylka, relativní hojnost). Součástí hodnocení je intaktní dekonvoluce hmotnostního spektra a porovnání s předepsanými kritérii.
Chromatografický experiment proběhl na DNAPac RP kolonce (Thermo Scientific) na systému Vanquish Horizon UHPLC za 42minutového gradientu (5 – 25 % organické fáze). Analýza plnohodnotného produktu (FLP) a nečistot byla realizována dvěma režimy:

• Data dependent MS/MS (Orbitrap Exploris 240) pro sekvenční potvrzení a lokalizaci modifikací.
• Full MS (Orbitrap Exploris MX) pro kvantitativní sledování relativního zastoupení komponent.

Použitá instrumentace

• UHPLC: Thermo Scientific Vanquish Horizon
• Chromatografická kolona: Thermo Scientific DNAPac RP
• Mass spektrometry: Thermo Scientific Orbitrap Exploris 240 a MX
• Software: Thermo Scientific Chromeleon CDS 7.3.1 a BioPharma Finder 5.0

Hlavní výsledky a diskuse

SPET test prokázal konzistentní splnění předem definovaných kritérií přes 10 replikací. Intaktní dekonvoluce hmotnostních spekter umožnila spolehlivou identifikaci FLP a nízkonivoových nečistot s odchylkou menší než 3 ppm. Metoda data dependent MS/MS poskytla úplné pokrytí fragmentace a vysoké skóre shody s predikovanými fragmenty. Přenos full MS metody mezi třemi přístroji Orbitrap Exploris potvrdil vynikající reprodukovatelnost kvantitativních výsledků ve srovnání s klasickým LC-UV profilem.

Přínosy a praktické využití metody

• Standardizované hodnocení připravenosti LC-MS systému (SPET) před analýzou vzorků.
• Integrované workflow pro detailní charakterizaci i rutinní monitoring oligonukleotidů.
• Vyšší citlivost a exactita oproti LC-UV metodám bez nutnosti absolutní baseline separace.
• Snadný přenos a automatizace metody v rámci Chromeleon eWorkflow.

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se rozšíření podobných přístupů na nové typy oligonukleotidových modifikací, rozvoj online automatizovaných QC řešení a implementace umělé inteligence pro rychlejší a spolehlivější identifikaci vzácných nečistot. Dalším krokem je integrace výsledků do procesů regulované dokumentace a reportingu.

Závěr

Navržený SPET test a LC-HRAM-MS workflow poskytují komplexní platformu pro charakterizaci a monitorování terapeutických oligonukleotidů. Metoda nabízí vysokou míru přesnosti, reprodukovatelnosti a snadnou přenositelnost mezi přístroji, čímž podporuje efektivní vývoj a kontrolu kvality nových léčiv.

Reference

Žádné formální literární citace uvedeny.