Extraction of a Drugs of Abuse Panel from Human Urine Using Biotage® Mikro ABN SPE Microelution Plates Prior to UPLC-MS/MS Analysis

Význam tématu

Analýza širokého panelu drog z lidské moči je klíčová pro forenzní toxikologii, klinická vyšetření a kontrolu kvality. Efektivní příprava vzorku s vysokým výtěžkem a čistotou je nutná pro spolehlivou kvantifikaci pomocí UPLC-MS/MS.

Cíle a přehled studie

Cílem studie bylo vyvinout rychlý a robustní protokol extrakce 49 drog z hydrolyzované lidské moči pomocí Biotage Mikro ABN microelution destiček. Studie hodnotí výtěžky, opakovatelnost, linearitu v rozsahu 1–1000 pg/mL a porovnává metodu s tradičními postupy.

Použitá instrumentace

• Biotage Mikro ABN SPE microelution destičky (2 mg)
• Biotage PRESSURE+ 96 Positive Pressure Manifold
• Biotage SPE Dry (sušicí jednotka) nebo TurboVap
• Shimadzu Nexera UHPLC se sloupcem Restek Raptor Biphenyl 2.7 µm (100×2.1 mm)
• Shimadzu 8060 Triple Quadrupole MS s ESI rozhraním

Použitá metodika

• Předúprava: 1 mL moči obohacené interními standardy, přidání 100 mM NH4OAc pH 5 a β-glukuronidázy, inkubace při 60 °C po dobu 2 h.
• Volitelné kondicionování: MeOH a 0,1 % NH4OH, následná equilibrace 0,1 % NH4OH.
• Načtení vzorku: 400 µL předúpravené moči.
• Praní: 0,1 % NH4OH a H2O/MeOH (90:10, v/v), 100 µL každého.
• Eluce: DCM/MeOH (90:10, v/v), 30 µL, následná evaporace vzduchem nebo dusíkem při 40 °C (cca 5 min) a reuplatnění v H2O/MeOH (90:10) s 0,1 % HCOOH (30 µL).
• Chromatografie: gradientní eluce mobilními fázemi (A: 2 mM NH4HCOO + 0,1 % HCOOH v H2O, B: 2 mM NH4HCOO + 0,1 % HCOOH v MeOH), průtok 0,4 mL/min, injekční objem 5 µL, teplota 30 °C.
• MS/MS: pozitivní režim MRM s optimalizovanými přechody a kolizními energiemi pro jednotlivé analyty.

Hlavní výsledky a diskuse

• Výtěžky většiny analyzátů > 80 % s RSD < 10 % při koncentraci 1 ng/mL.
• Linearita r² > 0,99 v rozsahu 1–1000 pg/mL pro všechny látky.
• LLOQ od 1 pg/mL až po 500 pg/mL dle analyzátu.
• Kompletní zpracování 96 vzorků včetně evaporace během ~22 min; zkrácená Load-Wash-Elute varianta ~17 min.
• Časová a spotřební úspora oproti 10 mg EVOLUTE® ABN destičce s obdobnými nebo lepšími výtěžky.

Přínosy a praktické využití metody

• Vysoká propustnost laboratoře díky microelution formátu a krátkému času zpracování.
• Spolehlivá kvantifikace širokého spektra drog pro forenzní, klinické i průmyslové aplikace.
• Minimalizace objemu organických rozpouštědel a spotřeby reagencií.

Budoucí trendy a možnosti využití

• Automatizace SPE procesu pro další zvýšení reproducibility a throughput.
• Doplnění panelu o nové psychoaktivní látky a metabolity.
• Integrace s vysoce rozlišujícími hmotnostními spektrometry pro pokročilou strukturální identifikaci.

Závěr

• Biotage Mikro ABN microelution protokol poskytuje rychlou, robustní a vysoce výtěžnou extrakci 49 drog z lidské moči.
• Metoda dosahuje vynikající linearity, nízkých LLOQ a výhodné doby zpracování oproti tradičním SPE destičkám.
• Ideální volba pro laboratoře požadující vysokou produktivitu a spolehlivost výsledků.

Reference

• V původním textu nebyl uveden žádný literární seznam.