Automated Extraction of 11-nor-9-Carboxy-Δ9- THC from Hydrolyzed Urine Using ISOLUTE® SLE+ Prior to GC/MS Analysis

Význam tématu

Stanovení metabolitu 11-nor-9-karboxy-Δ9-THC v moči je zásadní pro forenzní a pracovní toxikologii, zajištění dodržování regulačních limitů a rychlou detekci uživatelů konopných látek. Automatizovaná metoda SLE+ významně zjednodušuje přípravu vzorku, zkracuje dobu analýzy a minimalizuje riziko chyb při manuálních postupech.

Cíle a přehled studie

Cílem bylo vyvinout plně automatizovaný a validovaný postup extrakce karboxy-THC z hydrolyzované moči pomocí Biotage Extrahera a ISOLUTE SLE+ 1 mL kolonek. Metoda se zaměřuje na dosažení vysokých výtěžností, nízké směrné odchylky a splnění požadavků SAMHSA/EWDTS pro potvrzovací testy (15 ng/mL).

Použitá metodika a instrumentace

Metodika sestávala z následujících kroků:

• Pre-treatment: Do 1 mL moči se přidalo 20 µL vnitřního standardu (1 ng/µL), equilibrace 1 h, alkalická hydrolýza 10N NaOH (60 °C, 20 min), neutralizace 60 µL kyseliny octové.
• Extrakce: Aplikace vzorku na ISOLUTE SLE+ 1 mL kolonu, dvě dávky hexan/ethylacetát 50/50 (2×2,5 mL) pod gravitací, závěrečné odsátí vakuu/přetlaku.
• Koncentrace a derivatizace: Vysušení TurboVapem (40 °C), resekrece do ethylacetátu, sušení, derivatizace s BSTFA:TMCS 99:1 (70 °C, 25 min).

Instrumentace:

• Biotage Extrahera s 24 pozicemi (ISOLUTE SLE+ 1 mL, tabless p/n 820-0140-CG).
• GC/MS: Agilent 7890A/5975C, kolona Restek Rxi-5ms (30 m × 0,25 mm, film 0,25 μm), SIM režim.
• TurboVap LV (Biotage) pro sušení.

Hlavní výsledky a diskuse

Optimální protokol dosáhl průměrných výtěžností 85 % pro karboxy-THC a 82 % pro deuterovaný vnitřní standard s RSD < 10 % (n=7). Kalibrační křivka byla lineární v rozsahu 5–100 ng/mL (r2 > 0,999). Inferred LOQ se pohybovalo mezi 5 a 10 ng/mL, pod stanoveným limitem 15 ng/mL.

Přínosy a praktické využití metody

• Vysoká propustnost: 24 vzorků za ~35 minut.
• Reprodukovatelnost výsledků a minimalizace manuálních chyb.
• Splnění regulačních požadavků pro pracovní testy.

Budoucí trendy a možnosti využití

Rozšíření metody na další drogovo-metabolity, integrace s LC–MS/MS pro širší panel analyz, snížení spotřeby organických rozpouštědel a implementace green chemistry přístupů, miniaturizace a multiplexace extrakčních postupů.

Závěr

Plně automatizovaná extrakce karboxy-THC pomocí ISOLUTE SLE+ a Biotage Extrahera nabízí robustní, rychlý a vysoce výtěžný postup vyhovující forenzním a pracovním toxikologickým testům. Metoda umožňuje spolehlivé stanovení na úrovních pod 15 ng/mL s vysokou přesností.

Reference