Extraction and Clean-up of Aminoglycoside Antibiotics from Chicken Meat Using EVOLUTE® EXPRESS WCX Solid Phase Extraction Columns with Analysis by LC-MS/MS

Význam tématu

Identifikace a kvantifikace aminoglykosidových antibiotik v mase je zásadní pro zajištění bezpečnosti potravin a prevenci šíření antimikrobiální rezistence.

Cíle a přehled studie

Cílem studie bylo vyvinout rychlou a reprodukovatelnou metodu extrakce, očisty a kvantifikace gentamicinu, streptomycinu, spectinomicinu a neomycinu z kuřecího masa pomocí SPE a následné analýzy LC–MS/MS.

Použitá metodika a instrumentace

Vzorek kuřecího masa se homogenizoval a extrahoval s roztokem obsahujícím octan amonný, EDTA, NaCl a trichloroctovou kyselinu. Po odstředění a úpravě pH byla extrahovaná kapalina zpracována na SPE sloupcích EVOLUTE EXPRESS WCX (500 mg/6 mL). Po kondicionaci metanolem a vodou se vzorek naložil, promyl a eluoval 25 % kyselinou mravenčí. Konečný roztok byl doplněn do objemu 10 mL a filtrován.

• Solid-phase extraction: EVOLUTE EXPRESS WCX 500 mg/6 mL
• UPLC: Waters Acquity UPLC BEH Amide 1.7 µm, 2.1×50 mm
• Mobilní fáze: 20 mM HFBA ve vodě/acetonitrilu a v čistém acetonitrilu
• Detekce: Xevo TQD Triple Quadrupole MS s ESI v pozitivním módu, MRM režim

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda prokázala lineární odezvu (r2 > 0,990) v rozsahu 50–10 000 ppb dle jednotlivých analyzovaných látek. Mez detekce (LOQ) se pohybovala od 33 ppb pro gentamicin do 382 ppb pro streptomycin. Relativní obnovy se pohybovaly nad 80 % a iontové potlačení bylo minimální díky optimalizovanému přemytí nepolárních interferencí.

Přínosy a praktické využití metody

Tato protokol umožňuje spolehlivé stanovení aminoglykosidů v potravinové matrici s vysokou propustností vzorků, nízkou nutností složité přípravy kalibrace a kompatibilitou s regulačními limity USDA-FSIS.

Budoucí trendy a možnosti využití

Implementace plně automatizovaných SPE systémů, rozšíření panelu sledovaných antibiotik o další polarni látky, zavedení vysoce rozlišující HRMS detekce a vývoj zelenějších extrakčních roztoků pro udržitelnou laboratoř.

Závěr

Vyvinutá SPE–LC–MS/MS metoda pro extrakci aminoglykosidových antibiotik z kuřecího masa nabízí vysokou přesnost, reprodukovatelnost a odbourání živinových interferencí. Je vhodná pro rutinní kontrolu zbytků antibiotik ve výrobních a regulačních laboratořích.

Reference

Biotage. Application Note AN833.V.1: Extraction and Clean‐up of Aminoglycoside Antibiotics from Chicken Meat Using EVOLUTE EXPRESS WCX Solid Phase Extraction Columns with Analysis by LC–MS/MS. 2020.