Thermo Bio LC Columns - See your protein therapeutics in high resolution

Význam tématu

Charakterizace monoklonálních protilátek je klíčová pro kontrolu kvality, bezpečnost a účinnost biologických léčiv. Metody pro analýzu titru, agregátů, nabíjených variant, oxidace, konjugací léčiv (ADC), intactní molekuly, fragmentů, peptidová mapování a glykanové analýzy umožňují komplexní posouzení produktů.

Cíle a přehled studie / článku

Článek představuje jednotný pracovní postup využívající instrumentaci a chemií Thermo Scientific pro detailní charakterizaci protilátek. Cílem je ukázat široké spektrum metod na jedné platformě a maximalizovat rozlišení, robustnost a vysledovatelnost analýz.

Použitá metodika a instrumentace

• Stanovení titru: MAbPac Protein A kolony s Vanquish HPLC.
• Separace agregátů: MAbPac SEC-1 kolony pro SEC analýzu.
• Analýza nabíjených variant: ProPac Elite WCX, MAbPac SCX-10, pH gradienty CX-1 a Vanquish UHPLC doplněné monitorováním pH UltiMate PCM-3000.
• Oxidační varianty a ADC: HIC analýzy na MAbPac HIC-10, HIC-20, HIC-Butyl kolonech.
• Intactní protilátka a fragmenty: RP separace na MAbPac RP kolonech a hyphenace s Q Exactive Plus Orbitrap MS.
• Peptidová mapování: SMART Digest kity, SOLAµ SPE, Vanquish UHPLC a Acclaim Vanquish C18 kolona.
• Glykanová analýza: HILIC a mixed-mode na GlycanPac AXH-1, AXR-1 a Accucore 150 Amide HILIC kolonech.

Hlavní výsledky a diskuse

Systémy vykazují vysokou linearitu titrů (R²>0,999), účinnou separaci agregátů i dimerů, vynikající rozlišení nabíjených variant solnou i pH gradientní elucí, rychlé HIC separace oxidovaných variant a ADC dle DAR, detailní RP-MS rozlišení intactních molekul a glycoform, vysoce reprodukovatelné peptidové mapy a detailní glykanové profilování.

Přínosy a praktické využití metody

Jednotná platforma sjednocuje workflow, minimalizuje dobu vývoje metod, zvyšuje reprodukovatelnost, usnadňuje automatizaci a integraci s MS detekcí, umožňuje vysokou propustnost a úsporu vzorku.

Budoucí trendy a možnosti využití

Rozvoj ultra rychlých gradientů UHPLC, online monitorování pH, rozšířená integrace s vysokorozlišujícími MS, vývoj nových stacionárních fází, pokročilá automatizace, digitální validace a platformní přístupy pro komplexní charakterizaci biologik.

Závěr

Prezentovaná řešení Thermo Scientific poskytují komplexní nástroje pro charakterizaci monoklonálních protilátek napříč klíčovými atributy, čímž podporují efektivní vývoj a kontrolu kvality biologických léčiv.

Reference

• AN20813 Aplikace stanovení titru protilátek
• AN72362 SEC kolony pro analýzu agregátů
• AN20940 SEC-MS mAb fragmenty
• AN21843 IEX separace IgG2/4
• AN21844 Solný gradient IgG1
• AN21917 pH gradient CVA-MS
• AN21008 Vysokopropustná analýza mAb
• AN20784 Platformní pH-gradient CV
• AN21845 pH-gradient IgG1
• AN20946 Lineární pH-gradient mAb CV
• AN71062 Sialylace intactní mAb
• AN21092 CVA top mAb
• AN21919 Sekvenční verifikace mAb
• AN21200 RP fragmenty mAb
• AN71205 HIC-10 fragmenty
• AN21206 Kompatibilita SEC/HIC
• AN21047 HIC-20 oxidace mAb
• AN21079 HIC-Butyl pro ADC
• AN20754 Mixed-mode 2AB glykan
• AN20827 Native glycan AXH-1 + MS
• AN20908 AXR-1 2AB N-glycany
• AN20909 AXR-1 2AA N-glycany
• AN20910 AXR-1 2AA N-glycany
• AN21918 HCP v mAb přípravcích