LC-MS/MS Method for the Determination of Tenofovir from Plasma

Význam tématu

Antiretrovirová léčba vyžaduje spolehlivé stanovení koncentrace tenofoviru v plazmě pro monitorování léčby a výzkum farmakokinetiky. Robustní LC MS MS metodika přispívá k vysoké citlivosti, přesnosti a reprodukovatelnosti, což je klíčové pro klinický i vědecký provoz.

Cíle a přehled studie / článku

Hlavním cílem bylo vyvinout rychlý a efektivní postup pro extrakci a kvantifikaci tenofoviru z lidské plazmy. Studie hodnotí využití SOLA CX SPE 96 well plate a UHPLC kolony Hypersil GOLD ve spojení s tandemovou hmotnostní spektrometrií při měření koncentrací v rozmezí 1–1000 ng/mL.

Použitá metodika a instrumentace

Postup přípravy vzorku:

• Kondicionace SPE desky methanolem a vodou
• Aplikace plazmy s přídavkem formové kyseliny
• Promývání 1% formovou kyselinou ve vodě a v methanolu
• Eluce 20% amoniakálním roztokem v methanolu
• Evaporace za dusíku při 40 °C a rekonstituce v 90:10 voda methanol

Separační a detekční podmínky:

• UHPLC kolona Hypersil GOLD 1.9 μm, 50×2.1 mm
• Mobilní fáze A: 25 mM octan amonný pH 5 B: methanol
• Gradient 0–100% B za 1 minutu, průtok 0.8 mL/min, teplota kolony 40 °C
• MS analyzátor TSQ Vantage s HESI pozitronovou ionizací
• Monitorování přechodu m/z 288.1 → 176.2, kolizní energie 24 V

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda dosahuje:

• LOQ 1 ng/mL s jasně definovaným signálem bez interference
• Linearita 1–1000 ng/mL s koeficientem r2 0.998
• Přesnost QC na 500 ng/mL s CV < 3.7%
• Výtěžnost extrakce průměrně 88.5%

Chromatografický průběh vykazuje symetrické piky a stabilní výkon při opakovaných analýzách.

Přínosy a praktické využití metody

Tato metodika nabízí:

• Rychlou a jednoduchou přípravu vzorku bez nutnosti interního standardu
• Vysokou citlivost pro sledování nízkých koncentrací tenofoviru
• Sníženou spotřebu rozpouštědel a nižší provozní náklady
• Vysokou reprodukovatelnost vhodnou pro vysoce propustné laboratoře

Budoucí trendy a možnosti využití

Další vývoj může směřovat k:

• Automatizaci extrakce ve 96 well formátu
• Simultánnímu stanovení více antiretrovirotik
• Miniaturizaci metod a snížení spotřeby vzorku
• Využití vysoce rozlišujících hmotnostních spektrometrů

Závěr

Optimalizovaný postup s využitím SOLA CX SPE a kolony Hypersil GOLD ve spojení s TSQ Vantage MS poskytuje spolehlivé stanovení tenofoviru v plazmě. Metoda se vyznačuje vysokou citlivostí, přesností, reprodukovatelností a efektivitou vhodnou pro klinický výzkum i farmakokinetické studie.

Reference

• Kimberly Phipps Thermo Fisher Scientific Application Note 20687 2013