Plasma Free Metanephrines Quantitation with Automated Online Sample Preparation and Liquid Chromatography—Tandem Mass Spectrometry

Význam tématu

Plazmatické volné metanefriny (metanefrin a normetanefrin) představují klíčové biomarkery pro diagnostiku feochromocytomu. Díky vysoké selektivitě a citlivosti je LC-MS/MS v kombinaci s vhodnou přípravou vzorku zlatým standardem pro jejich kvantifikaci v klinickém výzkumu a diagnostice.

Cíle a přehled studie

Cílem bylo vyvinout plně automatizovanou metodu pro stanovení plazmatických volných metanefrinů s využitím online extrakce TurboFlow a zkrátit čas přípravy vzorku při zachování analytické výkonnosti původní offline IP-SPE metody.

Použitá metodika a instrumentace

Vzorky: 0,5 mL lidské plazmy nebo seřazená sérum (CSS), doplněné interními standardy a srážecí činidlo (10 % kyselina trichloroctová).
Online extrakce: TurboFlow Cyclone MCX-2 kolona s ion-pair perfluoroheptanovou kyselinou (PFHA).
Chromatografie: Thermo Scientific Hypercarb (50×3 mm, 5 μm) při 70 °C, celkový běh 12 minut.
Hmotnostní spektrometrie: TSQ Vantage s HESI-II zdrojem v pozitivním ionizačním módu, datový režim SRM.

Hlavní výsledky a diskuse

Recovery: absolutní 56–62 %, relativní ~91–98 %.
LLOQ a linearita: 6,3–455,4 pg/mL pro metanefrin, 12,6–954,5 pg/mL pro normetanefrin; přesnost 80–102 %, CV do 14 %.
Přesnost: intra-/interassay CV 2–10,5 %.
Ionizace: bez významného potlačení nebo zesílení signálu. Žádný carryover.
Interference: epinefrin byl rozlišen chromatograficky s rozdílem retence 0,3 minuty.

Přínosy a praktické využití metody

• Plná automatizace online extrakce zkracuje čas přípravy vzorku o více než 50 %.
• Eliminace offline SPE cartridgí snižuje náklady na analýzu.
• Metoda poskytuje robustní a reprodukovatelné výsledky vhodné pro klinické výzkumné laboratoře.

Budoucí trendy a možnosti využití

• Implementace do rutinní klinické diagnostiky endokrinních nádorů.
• Rozšíření na další biomarkery oxidovaných katecholaminů.
• Integrace se softwarovými platformami pro automatizovanou správu dat a kvality.

Závěr

Vyvinutá automatizovaná LC-MS/MS metoda s online TurboFlow extrakcí nabízí rychlou, cenově efektivní a citlivou kvantifikaci plazmatických metanefrinů. Analytické parametry metody splňují požadavky klinického výzkumu a diagnostiky feochromocytomu.

Reference

• He X., Kozak M. Quantitative Measurement of Plasma Free Metanephrines by IP-SPE and LC-MS/MS with PGC Column, Thermo Scientific AN539.
• He X. et al. J. Chromatogr. B Analyt. Technol. Biomed. Life Sci. 2011, 879(23), 2355–2359.
• Yuan C. et al. Rapid Commun. Mass Spectrom. 2011, 25(9), 1241–1249.
• He X., Kozak M. Anal. Bioanal. Chem. 2012, 402(9), 3003–3010.