Deoxycholic acid method transfer from the Corona ultra RS Charged Aerosol Detector to the Corona Veo (or Vanquish) Charged Aerosol Detector

Význam tématu

Analýza deoxycholové kyseliny je klíčová pro farmaceutickou kontrolu kvality, protože tato žlučová kyselina a její nečistoty ovlivňují bezpečnost a účinnost léčiv podle monografie USP 40–NF 35. Metoda HPLC s detekcí nabitých aerosolů (CAD) umožňuje detekci neutrálních a slabě ionizovatelných molekul bez chromatografických úprav, což rozšiřuje možnosti rutinního QA/QC v lékopisech i výzkumu.

Cíle a přehled studie

Hlavním cílem bylo přenést oficiální monografickou metodu pro stanovení deoxycholové kyseliny z detektoru Corona ultra RS CAD na novou generaci Corona Veo (Vanquish) CAD. Studie replikovala podmínky USP metody a ověřila srovnatelný výkon obou detektorů.

Použitá metodika a instrumentace

Chromatografické podmínky:

• UHPLC systém Thermo Scientific Vanquish Flex Quaternary
• Kolona Acclaim 120 C18, 4,6 × 150 mm, 3 µm
• Mobilní fáze A: 0,1 % formiová kyselina ve vodě
• Mobilní fáze B: 0,1 % formiová kyselina v acetonitrilu
• Gradient: 0–2 min 75 % A → 55 % A; 2–14 min 55 % A → 42 % A; 14–24 min 42 % A → 0 % A; 24–35 min 0 % A; 35–38 min návrat na 75 % A
• Průtok: 1,0 mL/min; teplota kolony: 30 °C; objem injekce: 25 µL

Detekce:

• Corona ultra RS CAD (PFV = 1,00; filtr 3 s; Neb. T = 25 °C)
• Corona Veo / Vanquish CAD (PFV = 1,20; filtr 5 s; Evap. T = 50 °C)

Reagencie a standardy:

• Acetonitril LC-MS grade, formiová kyselina 99 %, ultračistá voda
• Standardní látky USP: deoxycholová a cholová kyselina

Příprava roztoků:

• Stock standard 1 mg/mL v metanol/voda 80/20
• Pracovní standardy 0,01–0,0005 mg/mL v diluentu 80/20

Hlavní výsledky a diskuse

Optimalizace parametrů detektoru:

• Power Function Value: zkoušeno 1,0–1,3; vybráno 1,20 pro nejlepší linearitu kalibrace
• Evaporační teplota: zkoušeno 35, 50, 70 °C; 50 °C kompromis mezi citlivostí a šumem
• Digitální filtr: 5 s pro nejvyšší S/N při nízkých koncentracích

Systémová způsobilost:

• RSD plochy pro 0,01 mg/mL < 0,7 % na obou detektorech (USP požadavek < 3 %)
• S/N pro 0,0005 mg/mL > 32 na ultra RS a > 42 na Veo CAD (USP požadavek > 10)

Lineární rozsah: vážená regrese 1/plocha², R² = 0,9997 pro deoxycholovou kyselinu.
Stanovení obsahu:

• Vzorek čisté deoxycholové kyseliny ~98 % na obou systémech (limity 97–103 %)
• Směs cholové a deoxycholové kyseliny ~50 % obojí

Stanovení nečistot v 98% vzorku:

• Cholová kyselina a hlavní dihydroxymetabolity < 0,3 %; etylester a neznámá impurita < 0,3 %
• Celkové nečistoty 1,37 % (Veo) a 1,82 % (ultra RS), pod limitem USP ≤ 2 %

Přínosy a praktické využití metody

Zavedená metoda CAD lze snadno přenést mezi generacemi detektorů bez kompromisů ve výkonu. Umožňuje rutinní kontrolu kvality deoxycholové kyseliny i jejích nečistot podle lékopisných požadavků.

Budoucí trendy a možnosti využití

• Rozšíření CAD metod na další slabě ionizovatelné látky v Evropském a Farmaceutickém lékopise
• Automatizace a online optimalizace parametrů pomocí strojového učení
• Miniaturizace a integrace CAD do benchtop a portable LC systémů

Závěr

Přenos USP metody pro deoxycholovou kyselinu z Corona ultra RS CAD na Corona Veo/Vanquish CAD byl úspěšný. Optimalizované parametry PFV 1,20, Evap T 50 °C a filtr 5 s zajistily shodnou přesnost, citlivost i validitu s původní konfigurací.

Reference

1. Bailey B., Gamache P.H., Acworth I.N. Guidelines for Method Transfer and Optimization – from Earlier Model Corona Detectors to Corona Veo Detectors. Thermo Fisher Scientific TN157 (2014)
2. Bailey B., Plante M., Thomas D., Crafts C., Gamache P.H. Practical Use of CAD – Achieving Optimal Performance, in Charged Aerosol Detection for Liquid Chromatography and Related Separation Techniques. John Wiley & Sons, Inc., 2017, pp. 163–189
3. FDA Guidance for Industry: Bioanalytical Method Validation, May 2001
4. Gamache P.H., Kaufman S.L. Principles of Charged Aerosol Detection, in Charged Aerosol Detection for Liquid Chromatography and Related Separation Techniques. John Wiley & Sons, Inc., 2017, pp. 3–65