Ternary Gradient for Tenofovir Disoproxil Fumarate Impurity Profiling

Význam tématu

Tenofovir disoproxil fumarát (TDF) je klíčová složka kombinované terapie HIV a chronického viru hepatitidy B. Analýza organických nečistot v aktivních farmaceutických látkách je nezbytná pro zajištění bezpečnosti a účinnosti léku.

Cíle a přehled studie

Cílem práce bylo vyvinout rychlou a robustní metodu pro profilování nečistot TDF s detekcí raně eluovaných polarních sloučenin (adenin, tenofovir) i pozdě eluovaných nepolárních látek. Metoda vychází z USP Pending monografie, ale je upravena pro kompatibilitu s hmotnostní spektrometrií a zkrácení doby analýzy.

Použitá instrumentace

Vanquish Flex UHPLC System sestávající z

• System Base
• Quaternary Pump F
• Split Sampler FT
• Column Compartment H
• Active Pre-heater
• Diode Array Detector HL s 10 mm LightPipe flow cell

Kolona Accucore aQ, 2.6 µm, 2.1 × 100 mm.

Použitá metodika

Mobilní fáze byla připravena z 25 mM acetátového pufru pH 3,8 (A), methanolu (B) a acetonitrilu (C) řízených kvaternárním čerpadlem. Gradient:

• 0–4,0 min 0→70 % B, 0→15 % C
• 4,0–4,5 min stabilizace na 70 % B, 15 % C
• 4,5–5,0 min 70→25 % B, 15→70 % C
• 5,0–6,0 min 25 % B, 70 % C
• 6,0–6,1 min návrat na 0 % B a C
• 6,1–15 min re-rovnovážení

Průtok 0,6 mL/min, teplota kolony 40 °C, objem injekce 1 µL, detekce při 260 nm, zpracování v Chromeleon™ 7.2.

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda dosáhla rozlišení mezi adeninem a tenofovirem nad dvě jednotky (požadavek USP ≥ 1,5). Analýza 60 opakovaných injekcí testovacího roztoku po dobu 15 h prokázala vynikající robustnost: RSD retence 0,03 % a RSD plochy 0,3 % pro hlavní vrchol TDF. Ternární gradient umožnil současné oddělení raně a pozdě eluovaných sloučenin v rekordním čase pod 6 min.

Přínosy a praktické využití metody

Výsledná metoda poskytuje:

• Rychlou analýzu profilu nečistot pod 6 min místo původních 60 min
• Kompatibilitu s hmotnostní spektrometrií díky pufrovaným elučním činidlům
• Vysokou opakovatelnost a přesnost měření
• Snížené riziko precipitace solí a jednodušší přípravu elučních směsí

Budoucí trendy a možnosti využití

Další vývoj může směřovat k integraci on-line hyphenovaných technik (UHPLC-MS/MS) pro kvantitativní sledování nečistot v reálném čase. Rovněž je možné testovat podobný přístup na dalších protinádorových či antivirotikách s polaritou směsného charakteru.

Závěr

Implementace ternárního gradientu na Vanquish Flex UHPLC se sloupci Accucore aQ dosáhla rychlého, robustního a MS-kompatibilního profilu nečistot tenofovir disoproxil fumarátu. Metoda přesahuje požadavky monografie USP a nabízí významné zkrácení doby analýzy.

Reference

1. Authorized USP Pending Monograph for Tenofovir Disoproxil Fumarate, Version 1, accessed May 21, 2015.
2. Thermo Fisher Scientific. Vanquish UHPLC System Overview, accessed May 21, 2015.
3. Thermo Fisher Scientific. Accucore aQ C18 Polar Endcapped LC Column, accessed May 21, 2015.