Quantification of four immunosuppressants in human blood by LC-HRAM-MS for clinical research

Význam tématu

Monitoring imunosupresiv je klíčový pro zajištění optimální dávky u pacientů po transplantaci orgánů. Přesné stanovení koncentrací cyklosporinu A, everolimu, sirolimu a takrolimu v krvi předchází toxickým účinkům a riziku odmítnutí štěpu.

Cíle a přehled studie

Cílem bylo vyvinout a validovat rychlou, spolehlivou a vysoce výkonnou analytickou metodu pro kvantifikaci čtyř imunosupresiv v lidské celkové krvi za použití Vanquish Flex Binary UHPLC a Orbitrap Exploris 120 HRAM-MS.

Použitá metodika

• Příprava vzorku: Dvousložková precipitace bílkovin (zinek síran + methanol s interními standardy), centrifugace, odběr supernatantu.
• Chromatografie: Rozhraní gradientní eluční program na kolóně Hypersil GOLD (30 × 2,1 mm, 1,9 μm) při 70 °C; běžící čas 1,3 minuty.
• Hmotová spektrometrie: Plnoskenovací režim (Full Scan) v pozitivním ionizačním módu HESI, rozlišení 60 000, rozsah m/z 500–1300, AGC target 1e6.

Použitá instrumentace

• UHPLC: Thermo Scientific Vanquish Flex Binary
• Křemíková kolóna: Hypersil GOLD 30 × 2,1 mm, 1,9 μm
• MS: Thermo Scientific Orbitrap Exploris 120 s HESI
• Software: TraceFinder 5.1 pro akvizici a kvantifikaci

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda vykázala lineární rozsah kalibrace s vážením 1/x (R2 ≥ 0,9916), přesnost bias mezi –13,4 % a 4,7 % a vnitřní přesnost (CV) < 11 %. Nebyl prokázán žádný významný carryover. Nízké doby analýzy umožňují vysokou propustnost vzorků.

Přínosy a praktické využití metody

• Rychlá analýza (1,3 minuty) pro vysokou denní kapacitu laboratoře
• Jednoduchá off-line precipitace bílkovin
• Vysoká citlivost a přesnost vyhovující požadavkům terapeutického monitorování

Budoucí trendy a možnosti využití

Metoda lze rozšířit pro multiplexní stanovení dalších léčiv, automatizovat přípravu vzorků i datovou analýzu a integrovat do klinických platforem pro kontinuální TDM.

Závěr

Vyvinutá LC-HRAM-MS metoda poskytuje rychlou, robustní a přesnou kvantifikaci čtyř klíčových imunosupresiv v lidské krvi. Je snadno implementovatelná v klinických výzkumných a rutinních laboratořích.

Reference

• Renoulin G., De Nardi C., Barcenas M., Kern K. Quantification of four immunosuppressants in human blood by LC-HRAM-MS for clinical research. Thermo Fisher Scientific Technical Note TN000296-NA-EN, 2021.