Selective and sensitive method for estimation of liraglutide in human plasma using LCMS-8060

Význam tématu

Precizní měření hladin liraglutidu v lidské plazmě je klíčové pro farmakokinetické studie, monitorování terapie a optimalizaci dávek u pacientů s diabetem 2. typu či obezitou. Vysoce citlivé a selektivní metody zajišťují spolehlivá data o absorpci, distribuci a vylučování léčiva, což podporuje vývoj bezpečných a účinných léčebných protokolů.

Cíle a přehled studie

Cílem bylo vyvinout a validovat kvantitativní metodu pro stanovení liraglutidu v lidské plazmě pomocí pevné fáze extrakce (SPE) a LC-MS/MS na přístroji LCMS-8060. Klíčové parametry zahrnovaly dosažení dolní hranice kvantifikace (LLOQ) 0,50 ng/mL, lineární rozsah 0,50–200,00 ng/mL, vynikající opakovatelnost a minimální matrix efekt.

Použitá metodika a instrumentace

Vzorky plazmy byly podrobeny proteiny srážející precipitací methanolem a následné extrakci na SPE kartuších. Eluent byl upraven pro přímou injekci do UHPLC.

• UHPLC: Shimadzu Nexera X2, Shim-pack velox biphenyl kolona (100×2,1 mm, 2,7 µm), gradientní eluční režim s mobilními fázemi voda (s bufferem) a acetonitrilou, průtok 0,25 mL/min, teplota kolony 40 °C.
• MS/MS: Shimadzu LCMS-8060 triple quadrupole, ESI rozhraní s vyhřívanou kapilárou, polarita pozitivní, rychlé přepínání polarity, detekce v MRM režimu.

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda prokázala vysokou selektivitu bez interferencí v retenční době a MRM přechodech. Kalibrační křivka byla lineární v rozsahu 0,50–200,00 ng/mL (r2 > 0,98). Signál k šumu pro LLOQ překračoval poměr 10:1.

• Intradení přesnost a přesnost: % RSD < 14,5 %, % accuracy 96–110 % ve všech QC úrovních (LLOQ, LQC, MQC, HQC).
• Mezi denní opakovatelnost (3 PA série): % RSD < 13,1 %, % accuracy 102–107 %.
• Obnova: konzistentní globální recovery ~50,9 % na všech QC úrovních.
• Matrix efekt: průměrný faktor 0,97 (HQC) a 0,96 (LQC), % CV < 4 % potvrzující minimální potlačení.
• No carry-over: po injekci nejvyššího standardu nebyla detekována zbytková šarže v následujícím blank extraktu.
• Stability: vzorky stabilní při pokojové teplotě, v autosampleru, po zamražení–rozmražení a při dlouhodobé analýze.

Přínosy a praktické využití metody

Díky vysoké citlivosti a selektivitě umožňuje metoda spolehlivou bioanalýzu vzorků z farmakokinetických, toxikologických a klinických studií. Jednoduchá příprava vzorků a rychlý analytický běh podporují vysokou průchodnost laboratoře a minimalizují chyby. Výsledky jsou vhodné pro regulatorní podání a QA/QC procesy.

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se integrace automatizovaných SPE systémů a vyšších průtoků UHPLC pro další zvýšení kapacity. Vylepšené ionizační techniky a pokročilá softwareová řešení pro vyhodnocení dat mohou dále zvýšit citlivost a zkrátit dobu analýzy. Metoda lze adaptovat na jiné peptidové léčiva a biomarkery.

Závěr

Vyvinutá LC-MS/MS metoda na přístroji LCMS-8060 s použitím SPE extrakce nabízí robustní, citlivé a selektivní stanovení liraglutidu v lidské plazmě. Splňuje přísné validační kritéria a podporuje farmakokinetické a klinické studie s vysokou spolehlivostí výsledků.

Reference

• Liraglutide monograph for professionals. Drugs.com. American Society of Health-System Pharmacists. Retrieved 17 October 2021.
• File:Liraglutide_structure.svg. Wikipedia. Accessed October 17, 2021.