POSTUP IZOTACHOFORETICKÉHO STANOVENÍ KYSELINY THIODIGLYKOLOVÉ V MOČI ZA ODSOLENÍ A ÚPRAVY pH ANALYZOVANÉHO VZORKU

Význam tématu

Stanovení thiodiglykolové kyseliny v moči se používá jako citlivý biomarker expozice vinylchloridu a dalších chlorovaných látek. Díky aplikaci izotachoforézy je možné provádět rychlou a reprodukovatelnou analýzu bez složitých derivačních postupů.

Cíle a přehled studie

Cílem práce bylo optimalizovat izotachoforetickou metodu pro stanovení TDGA v moči tak, aby se minimalizoval vliv vysokých koncentrací solí a dosáhla opakovatelnost lepší než ± 3–5 %. Studie zahrnovala úpravu vzorku odsolením, volbu vhodného pH a elektrolytů a ověření linearity a shody s referenční voltametrií.

Použitá instrumentace

• Izotachoforézní analyzátor ZKI-01 (ÚRVJ Spišská Nová Ves)
• Kapiláry předseparační (0,8 mm × 22 cm) a analytické (0,3 mm × 17 cm)
• pH metr MV 870 s glazurovanou elektrodou
• Odstředivka M 52 a digitální váhy Sartorius 1702 MP8

Použitá metodika

• Odsolení moči přidáním 95 % ethanolu (poměr 1:8–1:10) a odstředěním krystalů při 0 °C
• Úprava pH vedoucího elektrolytu (0,01 M HCl) pomocí ε-aminokapronové kyseliny na pH 3,8–4,0
• Přidání 0,01 % (2-hydroxyethyl)celulosy pro zvýšení viskozity
• Terminační elektrolyt: 0,01 M octová kyselina
• Parametry separace: předseparační proud 250 μA, analytický 50 μA, objem vzorku 27 μL, rychlost papíru 0,5 mm·s⁻¹

Hlavní výsledky a diskuse

Optimalizované odsolení a pH v rozsahu 3,8–4,0 zajistilo čisté a dobře oddělené zóny TDGA od fosforečnanů a siřičitanů. Kalibrační křivka pro TDGA byla l = 0,2788 c + 8,5541 s R² = 0,9987. Reprodukovatelnost stanovení je lepší než 1,5 % při koncentraci 90 mg·l⁻¹. Metoda v širokém koncentračním rozsahu prokázala dobrou shodu s voltametrickým stanovením (10 vzorků, rozdíly v řádu jednotek mg·l⁻¹). U silně zasolených vzorků je možné zvýšit koncentraci Cl⁻ na 0,02 M pro zachování pufrační kapacity.

Přínosy a praktické využití metody

• Jednostupňová příprava vzorku zabraňuje chybám spojeným s derivačním a víceetapovým procesem
• Vysoká reprodukovatelnost a linearita vhodná pro QA/QC v průmyslových a klinických laboratořích
• Rychlá analýza bez nutnosti složitých organických rozpouštědel

Budoucí trendy a možnosti využití

• Automatizace a on-line odsolení
• Optimalizace elektrolytických systémů pro širší spektrum analytů
• Integrace izotachoforézy s hmotnostní spektrometrií
• Miniaturizace a přenosná zařízení pro polní monitoring

Závěr

Navržená izotachoforetická metoda pro stanovení thiodiglykolové kyseliny v moči nabízí rychlý, jednoduchý a vysoce reprodukovatelný postup s minimální vazbou na složité vzorkovací a derivativní kroky. Výsledky jsou spolehlivé v širokém koncentračním rozsahu a metoda se osvědčila v porovnání s voltametrií.

Reference

1. Marhold J.: Přehled průmyslové toxikologie – Organické látky, sv. 1, str. 103. Avicenum, Praha 1986.
2. Viola P.L., Bigotti A., Caputo A.: Cancer Res. 31, 516 (1971).
3. Creech J.L. Jr., Johnson M.N.: J. Occup. Med. 16, 150 (1974).
4. Samcová E.: Chem. Listy 88, 723 (1994).
5. Watanabe P.G., McGowan G.R., Gehring P.J.: Toxicol. Appl. Pharmacol. 36, 339 (1976).
6. Samcová E., Roth Z.: Prac. Lek. 47, 64 (1995).
7. McKenna M.J., Zempel J.A., Braun W.H., Gehring P.J.: Toxicol. Appl. Pharmacol. 45, 821 (1978).
8. Yllner S.: Toxicology 30, 257 (1971).
9. Samcová E.: Prac. Lek. 47, 58 (1995).
10. Dlasková Z., Dvořáková L., Bašová P., Pelclová D., Navrátil T.: Chem. Listy 95, 184 (2001).
11. Dlasková Z., Pelclová D., Surovcová H., Navrátil T.: Lek. Listy 30, 5 (2000).
12. Dlasková Z., Chýlková J., Navrátil T., Pelclová D.: Chem. Listy 94, 837 (2000).
13. Dlasková Z., Navrátil T., Heyrovský M., Pelclová D., Novotný L.: Anal. Bioanal. Chem. 375, 164 (2003).
14. Boček P. a kol.: Analytická kapilární izotachoforéza. Academia, Praha 1987.
15. Everaerts F.M., Beckers J.Z., Verheggen Th.P.E.M.: Isotachophoresis. Theory, instrumentation and applications. Elsevier, Amsterdam 1976.
16. Křivánková L., Samcová E., Boček P.: Electrophoresis 5, 226 (1984).
17. Murray R.K.: Harperova biochemie (J. Kraml Ed.). Nakladatelství a vydavatelství H+H, Praha 1998.
18. Panušová P.: Diplomová práce. Univerzita Pardubice, Pardubice 1998.
19. Bardoděj Z., David A., Šedivec V., Škramovský S., Teisinger J.: Expoziční testy v průmyslové toxikologii. Avicenum, Praha 1989.