LC/MS/MS Method Package for Modified Nucleosides

Význam tématu

Ribonukleové kyseliny (RNA) jsou klíčové pro syntézu bílkovin a podléhají řadě enzymatických modifikací. Při buněčném rozkladu se modifikované nukleosidy uvolňují do cytosolu a následně vylučují močí. Analýza těchto upravených nukleosidů umožňuje získat cenné informace o fyziologických i patologických procesech, včetně závažnosti infekcí, jakou je COVID-19.

Cíle a přehled studie

Studie si klade za cíl vyvinout rychlou, citlivou a reprodukovatelnou LC/MS/MS metodu pro kvantifikaci dvou modifikovaných nukleosidů (ms2t6A a t6A) v krevním séru a moči. Metoda byla optimalizována tak, aby bez nutnosti časově náročného vývoje poskytovala spolehlivé výsledky během šesti minut analýzy.

Použitá metodika a instrumentace

Pro přípravu vzorků séra a moči byly navrženy protokoly zahrnující extrakci a odstranění proteinů, čímž se zajišťuje minimální matice a vysoká opakovatelnost.

• Chromatografie: Rychlá separace na specializované kolóně s analýzou do 6 minut.
• Hmotnostní spektrometrie: LCMS-8000 série a LCMS-8060NX s optimalizovanými parametry MS/MS pro vysokou citlivost.
• IonFocus čočky: Redukce kontaminace z matrice a prodloužení intervalů mezi údržbami.

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda umožňuje selektivní detekci a kvantifikaci ms2t6A a t6A s vynikajícím rozlišením a rychlostí. Optimalizace separace a MS/MS podmínek vedla k reprodukovatelným signálům, nízkému šumu a minimálnímu vlivu matrice. Výsledky potvrzují vhodnost metody pro klinické a výzkumné aplikace.

Přínosy a praktické využití metody

Navrhovaná metoda šetří čas díky krátké době analýzy, snižuje náklady na vývoj vlastních postupů a lze ji snadno implementovat v existujících laboratořích vybavených systémy Shimadzu LCMS. Umožňuje monitorování biomarkerů v klinických studiích a diagnostických laboratořích.

Budoucí trendy a možnosti využití

Metoda lze rozšířit o další modifikované nukleosidy pro komplexnější biomarkerové studie. Perspektivní je automatizace přípravy vzorků, integrace s datovými platformami pro klinickou diagnostiku a využití ve výzkumu dalších infektivních a nevirových onemocnění.

Závěr

Vyvinutá LC/MS/MS metoda představuje rychlé, robustní a citlivé řešení pro kvantifikaci modifikovaných nukleosidů v séru a moči. Díky optimalizované chromatografii a MS/MS parametru nabízí vysoký throughput a jednoduchou implementaci do laboratorní praxe.

Reference

• Patentové přihlášení: Japanese application No. 2021-038698.