Development of an UHPLC Method for Azithromycin Tablets Using ChromSword Auto Software

Význam tématu

Vývoj rychlé, robustní a reprodukovatelné chromatografické metody je klíčový pro farmaceutickou kontrolu kvality. Tradiční vývoj HPLC metod je časově náročný a vyžaduje řadu pokusů a omylů. Automatizace tohoto procesu zkracuje dobu vývoje, minimalizuje spotřebu činidel a zvyšuje opakovatelnost výsledků.

Cíle a přehled studie

Cílem studie bylo vytvořit rychlou UHPLC metodu pro analýzu azithromycinových tablet a jejich nečistot (M, E, A) s využitím Agilent 1200 Infinity LC Method Development System a ChromSword Auto softwaru. Pracovní postup zahrnoval čtyři kroky: screening, rychlou optimalizaci, testy robustnosti a ověření výsledné metody. Výsledkem byla runtime 6 minut oproti 93 minutám u USP metody.

Použitá metodika a instrumentace

• Instrumentace Agilent 1200/1290 Infinity: binary pump, autosampler, termostatovaná kolona, DAD detektor, solventní ventily
• Software: ChromSword Auto 4.0 (rapid optimization), ChromSword AutoRobust (robustnost), Method Scouting Wizard, OpenLab CDS
• Kolony: Agilent Poroshell HPH-C8 (3.0×50 mm, 2.7 μm), Poroshell EC-C18, testováno 8 různých chemických modifikací
• Reagencie: acetonitril, metanol, farmaceutické nečistoty M, E, A, vodné buffery (volatilní a USP pH 8.9)
• Příprava vzorku: rozdrcení tablet, extrakce acetonitrilem, sonikace, centrifugace, ředění do požadované koncentrace

Hlavní výsledky a diskuse

• Screening: nejlepší selektivitu prokázaly kolony HPH-C8 a EC-C18 při pH 10.8 s acetonitrilem
• Rapidní optimalizace: použití USP bufferu pH 8.9 na HPH-C8 vedlo k rozlišení kritické dvojice nečistot (rozlišení >2) a hodnotám tailingu <2
• Robustnost: DoE studie s třemi úrovněmi pH (8.7–9.1), průtoku (±0.2 mL/min), teploty (±5 °C) a break pointů (±0.2 min) definovala design space zaručující stabilní rozlišení
• Ověření: ověřeno v design space, stabilní RRT všech nečistot, piková čistota API 99.9 % (UV), při 250 injekcích RSD RT<0.05 % a RSD plochy<0.85 %
• Backpressure ~150 bar, kompatibilní s UHPLC systémy

Přínosy a praktické využití metody

• Výrazné zkrácení doby analýzy a snížení spotřeby mobilní fáze
• Vysoká reprodukovatelnost a robustnost vhodná pro rutinní QC a validaci
• Kompatibilita s detekcí LC-MS díky volitelným volatilním buffrům
• Možnost rychlé adaptace na další farmaceutické API

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se další rozvoj automatizovaných metod vývoje chromatografie s podporou umělé inteligence a strojového učení. Integrace online monitoringu kvality separace, rozšíření na metabolomické profily, a propojení s vysokorychlostními hmotnostními spektrometry umožní komplexnější charakterizaci vzorků.

Závěr

Automatizovaný přístup využívající ChromSword Auto a Agilent Infinity LC System umožnil vytvořit vysoce efektivní UHPLC metodu pro azithromycin s runtime 6 minut, vynikající robustností a reprodukovatelností. Tento přístup významně zrychluje a zjednodušuje vývoj farmaceutických analytických metod.

Reference

• Sergey F. Application of ChromSword Software for Automatic HPLC Method Development and Robustness Studies. Separation of Terbinafine and Impurities. 2013;10(19):10.
• Sergey R. Automated Method Development Using Agilent 1100 Series HPLC Systems. Agilent Technologies, Waldbronn, Germany; Publication No. 5988-8927EN, March 2004.
• Azithromycin. In: Wikipedia. 2024.
• USP–NF 37 Monographs. Official from May 2014; pp. 1886–1897.