Optimize the Agilent 1260 Infi nity Analytical SFC Solution with the Agilent 1290 Infi nity ELSD

Význam tématu

Moderní superkritická fluidní chromatografie (SFC) v kombinaci s detektorem ELSD umožňuje citlivou analýzu sloučenin s nízkou UV aktivitou a termolabilních látek. Nízká viskozita CO2 a lepší difuze přináší rychlejší separace a vyšší účinnost, což doplňuje klasické HPLC metody.

Cíle a přehled studie / článku

Studie se zaměřila na optimalizaci připojení Agilent 1260 Infinity Analytical SFC řešení k Agilent 1290 Infinity ELSD. Hlavním cílem bylo zlepšit výkon detekce pomocí předehřátí eluátu a zavedení make-up toku, včetně statistické evaluace signál-šum poměru a opakovatelnosti.

Použitá instrumentace

• Agilent 1260 Infinity Analytical SFC Solution (řídicí modul, SFC binární čerpadlo, autosampler, termostatovaná kolona (TCC), DAD s vysokotlakou flow cell)
• Agilent 1290 Infinity Thermostatted Column Compartment pro předehřátí eluátu a Agilent 1290 Infinity ELSD
• Kolona Agilent ZORBAX Rx-SIL (4,6×150 mm, 5 μm)
• Software Agilent OpenLAB CDS ChemStation (revize C.01.05)

Metodika

Pro testy byla připravena směs osmi standardních sloučenin v koncentraci 10 μg/mL (kofein, theofylin, kortison, prednison, hydrokortison, prednisolon, sulfamerazin, sulfaquinoxalin). Chromatografické podmínky: CO2/methanol (gradient 5–25 % methanolu za 10 min), tok 3 mL/min, BPR 290 bar při 60 °C, kolona 40 °C. Eluát za DAD byl rozdělen splitterem, část vedena na ELSD, část do BPR. Předehřátí eluátu probíhalo ve druhém TCC s výměníkem o objemu 3 μL. Make-up tok methanolu testován v rozmezí 0–0,4 mL/min. ELSD parametry: evaporátor 40 °C, mlžící teplota 55 °C, plyn 1,15 SLM, data rate 10 Hz, PMT gain 5.

Hlavní výsledky a diskuse

Předehřátí eluátu na 30 °C oproti přímému napojení zvýšilo plošnou citlivost a výšku píků u všech sloučenin. Vyšší teploty (40 a 60 °C) vedly k poklesu signálu. Optimalizované předehřátí přineslo nejlepší signál-šum poměr a plošné RSD kolem 12 %. Make-up tok 0,2 mL/min minimalizoval RSD plošných i výškových hodnot (4–6 %) při zachování S/N; vyšší toky způsobily ředění a snížení S/N.

Přínosy a praktické využití metody

Navržená konfigurace poskytuje robustní a citlivou detekci slabě UV aktivních látek. Předehřátí zabraňuje ochlazování vzorku po expanzi CO2 a make-up tok zajišťuje stabilní průtok pro detektor, což zlepšuje opakovatelnost měření.

Budoucí trendy a možnosti využití

Směr dalšího vývoje směřuje k integrovaným řešením s automatickou regulací teploty eluátu a adaptivními splittery. Kombinace SFC-ELSD s hmotnostní detekcí rozšíří aplikační možnosti v analýze komplexních vzorků.

Závěr

Pro dosažení nejlepších výsledků v kombinaci SFC a ELSD je klíčové předehřátí eluátu na 30 °C a zavedení make-up toku 0,2 mL/min. Tato konfigurace zvyšuje citlivost, stabilitu a reprodukovatelnost analýz.

Reference

• Naegele E. Optimize the Agilent 1260 Infinity Analytical SFC Solution with the Agilent 1290 Infinity ELSD. Agilent Technologies, Inc. Technical Overview, 2014, 5991-5144EN.