Ultra High Performance Liquid Chromatograph Shimadzu Nexera series - Technical Reports / Applications

Význam tématu

V analýze čajových extraktů a dalších potravinářských matric je stanovení obsahu theaninu klíčové pro hodnocení kvality, chuti a fyziologických účinků výrobku. Theanin je hlavní aminosloučeninou v zeleném čaji, ovlivňuje jeho charakteristickou chuť a prokazuje pozitivní vliv na lidské zdraví. Moderní chromatografické metody usilují o co nejrychlejší, citlivé a plně automatizované stanovení této látky bez náročných předúprav.

Cíle a přehled studie

Cílem bylo zavést a ověřit jednoduchou, rychlou a plně automatizovanou metodu pro simultánní stanovení theaninu a dalších proteinogenních aminokyselin v čajových vzorcích. Metoda vychází z automatické precolumn derivatizace o-fthaldialdehydem (OPA) v autosampleru Nexera X3 v ko-injekčním režimu a následné separace na UHPLC kolóně Shim-pack XR-ODS.

Použitá metodika a instrumentace

• Automatický systém Nexera X3 s autosamplerem SIL-40C XR
• Shim-pack XR-ODS kolona (100 × 3,0 mm I.D., 2,2 µm)
• Postup ko-injekční derivatizace těkavou OPA/MPA směsí přímo v injekční jehle
• Mobilní fáze: acetátový pufr pH 6 a 5, methanol, acetonitril
• Detekce: fluorescenční detektor (Ex 350 nm/Em 450 nm)
• Teplota 40 °C, průtok 1,0 mL/min, objem injekce 1 µL

Hlavní výsledky a diskuse

• Všechny aminokyseliny vč. theaninu byly účinně odštěpeny během 15 minut.
• Kalibrační křivky pro vybrané aminokyseliny (theanin, Asp, Glu, Ser, Gln, Arg) v rozmezí 0,25–25 µmol/L dosáhly lineárnosti R² ≥ 0,9997.
• Opakovatelnost (n=6) ukázala koeficient variace ≤1,3 % pro ret. časy a plochy.
• Extrakty zeleného čaje se připravují jednoduše vodným macerátem, filtrace a 10× ředění.

Přínosy a praktické využití metody

• Metoda nevyžaduje složité off-line derivatizace, celý postup je automatizován v autosampleru.
• Výrazné zkrácení doby analýzy a přípravy ve srovnání s konvenčními postupy.
• Vysoká přesnost, citlivost a reprodukovatelnost činí metodu vhodnou pro rutinní kontrolu kvality čajů, potravin a doplňků.

Budoucí trendy a možnosti využití

• Rozšíření ko-injekční derivatizace na další derivátovatelné látky (aminokyseliny, biogenní aminy).
• Integrace s on-line vzorkovači pro vysokokapacitní screening vzorků.
• Využití v rámci komplexních metabolomických studií čajových extraktů a potravin.

Závěr

Auto­ma­tizovaná precolumn derivatizace OPA a ko-injekční režim na systému Nexera X3 v kombinaci s UHPLC kolónou Shim-pack XR-ODS umožňují spolehlivé, rychlé a vysoce reprodukovatelné stanovení theaninu a dalších hlavních aminokyselin v čajových vzorcích. Metoda výrazně zjednodušuje přípravu vzorků a nabízí vysokou propustnost vyhovující požadavkům rutinní laboratoře.

Reference

• Application News No. L544: Simple and Quick Analysis of Theanine in Tea by Automatic Pre-Column Derivatization Method