Organ transplantationplantation

Význam tématu

Terapeutické monitorování imunosupresiv sirolimusu (SRL) a takrolimu (TRL) je klíčové pro úspěch léčby pacientů po transplantaci orgánů. Přesné stanovení krvnních koncentrací zabezpečuje optimální dávkování, minimalizuje riziko odmítnutí štěpu a snižuje vedlejší účinky.

Cíle a přehled studie

Cílem bylo vyvinout rychlou, citlivou a částečně automatizovanou HPLC-MS metodu pro současné kvantitativní stanovení SRL a TRL v plné krvi. Metoda měla splnit požadavky na nízké meze kvantifikace, vysokou průchodnost a účast v referenčním testovacím schématu.

Použitá metodika

Vzorky EDTA ošetřené plné krve byly deproteinovány směsí 0,1 M síranu zinečnatého a methanolu (70:30, v/v) s interními standardy 32-desmethoxysirolimus a askomycin (1 µg/L). Po vortexování a centrifugaci byl supernatant extrahován na C18 SPE kartridži. Imunosupresiva byla eluoána 2-propanolem s 0,1 % kyseliny mravenčí, následovalo odpaření dusíkem při pokojové teplotě a rekonstituce v acetonitrilu před injekcí.

Použitá instrumentace

HPLC systém spojený s jednochodým kvadrupólovým hmotovým spektrometrem Shimadzu LCMS-2010, SPE modul pro automatizovanou extrakci, C18 kartridže a chromatografická kolona udržovaná při 40 °C.

Hlavní výsledky a diskuse

Kalibrační křivky v rozsahu 0–40 µg/L pro SRL a TRL vykazovaly linearitu (r2>0,998). LLOQ dosahovalo 1 µg/L pro SRL a 0,5 µg/L pro TRL. Intradenní koeficient variační (CV) i přesnost (bias) pro QC vzorky byly v rozsahu ±15 %. Automatizovaná extrakce zlepšila opakovatelnost a eliminovala carry-over efekt. Kolona si zachovala výkon při analýze přes 1 000 vzorků bez výměny.

Přínosy a praktické využití metody

Prezentovaná semi-automatizovaná metoda nabízí vysokou citlivost a propustnost pro rutinní terapeutické monitorování imunosupresiv. Minimalizuje manuální zásahy a umožňuje rychlá rozhodnutí v rámci úprav dávek.

Budoucí trendy a možnosti využití

Možnosti rozšíření zahrnují multiplexní stanovení dalších P450 3A4 a P-glikoproteinem ovlivňovaných látek, plnou automatizaci pracovního postupu a miniaturizaci SPE formátů pro úsporu reagencií.

Závěr

Vyvinutá HPLC-MS metoda pro stanovení sirolimusu a takrolimu v plné krvi prokázala vysokou robustnost, citlivost a spolehlivost. Metoda je připravena pro rutinní použití v referenčních laboratořích pro terapeutické monitorování.

Reference

• Holt DW, Marwaha G, Jones K, Johnston A. Therapeutic Drug Monitoring. 1993;15:472–477.
• ASL International. International Proficiency Testing Scheme. Analytical Services International; London, UK.