A Simplified Solid Phase Extraction (SPE) Protocol for Bioanalysis Using Oasis HLB

Význam tématu

Solid-phase extraction (SPE) je klíčovou technikou při přípravě vzorků v bioanalýze pro izolaci a koncentraci nízkokoncentrovaných analytů z komplexních biologických matric. Tradiční protokoly SPE vyžadují pět kroků včetně kondicionování a ekvilibrace a bývají časově a materiálově náročné. Zjednodušení tohoto postupu přináší významné výhody v rychlosti, nákladech a efektivitě analýzy.

Cíle a přehled studie

Cílem studie bylo ověřit jednoduchý tříkrokový SPE protokol na bázi sorbentu Oasis HLB v µElution platech a 1 cc cartridge pro široké spektrum kyselých, neutrálních a bazických farmaceutických sloučenin a jejich metabolitů v plazmě a moči. Protokol se skládá pouze z fáze naložení, promytí a elučního kroku, čímž se vynechávají kroky kondicionování a ekvilibrace.

Použitá metodika a instrumentace

Metodika:

• Vzorky: lidská plazma a moč obohacená rutinními analyty (antidepresiva, NSAID, antiretrovirální látky)
• Protokol: 3 kroky – naložení 200 µl vzorku, promytí 200 µl 5 % MeOH, eluce 25 µl MeOH
• Formáty SPE: µElution desky Oasis HLB (30 mg sorbentu) a 1 cc cartridge
• Hodnocení: procento návratnosti, faktory matrice, reprodukovatelnost mezi šaržemi

Instrumentace:

• ACQUITY UPLC I-Class se CSH C18 kolonou (2.1×100 mm, 1.7 µm)
• Xevo TQ-S s ESI+ detekcí
• Mobilní fáze: 0.1 % kyselina mravenčí ve vodě a v acetonitrilu

Hlavní výsledky a diskuse

Implementace zjednodušeného protokolu vedla k:

• vysokým recovery > 80 % a nízké variabilitě (< 5 %) v plazmě i moči
• ekvivalentním faktorům matrice (1.00 ± 0.15) oproti standardnímu postupu
• 40 % zkrácení doby přípravy a 70 % úspoře spotřeby rozpouštědel
• vhodné kapacitě pro objemy vzorků 25–375 µl
• stabilní reprodukovatelnosti mezi šaržemi Oasis HLB vyrobenými v letech 2005–2013

Přínosy a praktické využití metody

Metoda umožňuje výrazně zvýšit průchodnost analýz, snížit náklady na činidla a pracovní čas laboratoře. µElution formát navíc umožňuje koncentrovat analýty bez potřeby sušení a rekonstituce.

Budoucí trendy a možnosti využití

Další rozvoj může směřovat k automatizaci protokolu v kombinaci s robotikou, rozšíření na další biologické matrice a optimalizaci nových sorbentů pro specifické aplikace. Integrace do workflow UPLC-MS high throughput analýzy zvýší efektivitu farmaceutického vývoje.

Závěr

Zjednodušený tříkrokový SPE protokol s Oasis HLB prokázal srovnatelnou účinnost a reprodukovatelnost oproti standardnímu postupu při významné úspoře času a rozpouštědel. Tato metoda je vhodná pro rutinní bioanalytické studie v plazmě i moči.

Reference