The Development of a Sensitive Multi-Residue LC-MS/MS Method for the Quantitative Determination of Mycotoxins in Animal Feedstuffs and Silage Using Xevo TQ-S

Význam tématu

Mykotoxiny jsou toxické metabolity plísní, které často kontaminují krmiva a siláž a mohou způsobit imunosupresi, snížený příjem krmiva a ekonomické ztráty v živočišné výrobě. Nízké, submikrogramové koncentrace v komplexních matricích vyžadují vysoce citlivé a spolehlivé analytické metody.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem bylo vyvinout kvantitativní multi-reziduální metodu pro simultánní stanovení 33 mykotoxinů v krmivech a siláži. Metoda kombinuje rychlou chromatografii UPLC s tandemovou hmotnostní spektrometrií (MS/MS) na přístroji Xevo TQ-S s databází Quanpedia pro optimalizaci MRM přechodů.

Použitá metodika a instrumentace

• Extrahování: 84:16 (v/v) acetonitril : kyselé vodné fáze, mechanická homogenizace, centrifugace a následné ředění extraktu 1:10.
• Chromatografie: Waters ACQUITY UPLC I-Class, kolona BEH C18 (2,1×100 mm, 1,7 µm), teplota 40 °C, gradientní eluce s formiovou kyselinou v mobilních fázích.
• MS/MS: Xevo TQ-S s ESI v režimu +/– switching, kapilární napětí 3,4 kV, Quanpedia pro MRM přechody a časové okno pro zajištění ≥12 datových bodů na špičku.

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda dosahuje hranic detekce v rozsahu ppt až nízkých ppb v matrici i v čistém standardu. Vnitrodenní přesnost (RSD) byla ≤23 % u všech testovaných mykotoxinů. Zjištěné koncentrace v reálných vzorcích krmiv se pohybovaly od sub-1 µg kg⁻¹ do ~300 µg kg⁻¹ a v silážích od ~20 do 260 µg kg⁻¹. Jednoduché ředění extraktu významně snížilo potlačení signálu a variabilitu matricového pozadí.

Přínosy a praktické využití metody

• Simultánní stanovení širokého spektra mykotoxinů v různých typech krmiv a siláží.
• Vysoká citlivost a reprodukovatelnost vhodná pro screening i kvantifikaci.
• Jednoduchá příprava vzorku s minimální potřebou čištění.
• Rychlý analytický běh umožňuje vysokou propustnost laboratoře.

Budoucí trendy a možnosti využití

Rozšiřování metodiky o izotopově značené interní standardy, využití vysokého rozlišení MS pro neznámé mykotoxiny, automatizace přípravy a zpracování dat pomocí pokročilých softwarových nástrojů a strojového učení pro identifikaci neobvyklých kontaminantů.

Závěr

Vyvinutá UPLC-MS/MS metoda s Xevo TQ-S pro stanovení 33 mykotoxinů v krmivech a siláži prokázala vysokou citlivost, přesnost a robustnost při minimální přípravě vzorku. Metoda je vhodná pro rutinní screening i kvantitativní analýzu v oblasti QA/QC a výzkumu.

Reference

• World-grain news: přehled znečištění obilovin mykotoxiny.
• Směrnice EU 2003/100/ES a Doporučení 2006/576/ES o povolených limitech mykotoxinů.
• EFSA: rizika mykotoxinů v potravinách a krmivech.
• FSA: bezpečnost krmiv a mykotoxinová kontaminace.
• G J Mol, P Plaza-Bolanos, P Zomer, T C de Rijk, A A M Stolker, P Mulder, Anal Chem. 80(24):9450–9459, 2008.