2D-LC
ZaměřeníFarmaceutická analýza
VýrobceAgilent Technologies
Význam tématu
Detailní analýza kvality bioterapeutik, zejména monoklonálních protilátek, je klíčová pro zajištění jejich bezpečnosti a účinnosti. Agregace a variabilita náboje představují základní kritéria pro stabilitu a biologickou aktivitu látek.
Cíle a přehled studie
Cílem aplikace bylo demonstrovat využití online 2D-LC spojení velikostní-exkluzní chromatografie (SEC) a slabě kationtové výměnné chromatografie (WCX) v jediné analýze. Metoda umožňuje simultánní kvantifikaci agregátů i profilování nábojových variant v čase kratším než 15 minut.
Použitá metodika a instrumentace
Pro 2D-LC se použil systém Agilent 1290 Infinity II 2D-LC s následujícími moduly:
- Agilent 1260 Infinity Bio-Inert Quaternary Pump (první dimenze)
- Agilent 1290 Infinity II High-Speed Pump (druhá dimenze)
- Agilent 1290 Infinity II Multisampler s chlazením (6 °C)
- Agilent 1290 Infinity II Multicolumn Thermostat (RT)
- Dva Agilent 1290 Infinity Valve Drives s multiple heart-cutting ventily (40 µL smyčky)
- Agilent 1290 Infinity Valve Drive pro 2D-LC (2 pozice/4 porty)
- Dva Agilent 1290 Infinity II Diode Array Detectory (10 mm buněčná vložka)
- Agilent AdvanceBio SEC 300 Å, 4,6 × 150 mm, 2,7 µm
- Agilent Bio MAb 4,6 × 50 mm, 1,7 µm, nonporózní
Pufry a vzorek: 50 mM fosfátový pufr pH 6,2 spolu s NaCl pro eluci WCX, mAb roztok 10 mg/mL.
Hlavní výsledky a diskuse
Analýza odhalila přibližně 1 % agregátů před hlavní monomerovou formou. Pomocí heart-cutting 2D-LC bylo možné přesně oddělit hlavní monomer od agregátu a následně provést nábojové profilování. Ve druhé dimenzi byly identifikovány dvě kyselé a jedna bazická varianta. Měření sedmi opakování prokázalo vysokou přesnost retenčního času (RSD < 0,09 %) a plochy (RSD < 2,1 %). HiRes sampling potvrdil absenci koelujících příměsí.
Přínosy a praktické využití metody
Spojení SEC a WCX v jediném automatizovaném běhu eliminuje potřebu samostatných analýz, zkracuje dobu stanovení kvalitativních atributů a snižuje manipulaci se vzorky. Vysoká přesnost a citlivost přispívají k robustní kontrole kvality během vývoje i výroby.
Budoucí trendy a možnosti využití
Očekává se rozšíření online 2D-LC o další chromatografické režimy, jako je afinitní nebo reverzní fáze, pro komplexní charakterizaci bioléčiv. Další vývoj softwarových nástrojů a miniaturizace modulů podpoří vyšší propustnost a integraci s hmotnostní spektrometrií.
Závěr
Metoda online 2D-LC SEC-WCX poskytuje souhrnnou a rychlou charakterizaci monoklonálních protilátek s vysokou přesností a rozlišením. Umožňuje efektivní monitoring klíčových kvalitatních atributů a představuje významný přínos pro biofarmaceutický výzkum a výrobu.
Reference
- ICH Topic Q6B, Specifications: Test Procedures and Acceptance Criteria for Biotechnological/Biological Products.
- Agilent, Access Newsletter, březen 2016.
- Du Y. et al. Chromatographic analysis of the acidic and basic species of recombinant monoclonal antibodies. MAbs, 2012, 4(5), 578–585.
- Schneider S. Simple Method Optimization in mAb Charge Variant Analysis using pH Gradients Generated from Buffer Advisor with Online pH and Conductivity Monitoring. Agilent Application Note 5991-3365EN, 2014.
Obsah byl automaticky vytvořen z originálního PDF dokumentu pomocí AI a může obsahovat nepřesnosti.
