Plasma Catecholamines by LC/MS/MS

Význam tématu

Katecholaminy jako norepinefrin, epinefrin a dopamin jsou základními biomarkery neuroendokrinních a kardiovaskulárních onemocnění. Jejich přesná a citlivá kvantifikace v plasmě podporuje diagnostiku feochromocytomu, monitorování stresové reakce a farmakokinetická studia terapeutik.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem bylo vyvinout robustní LC/MS/MS metodu pro simultánní stanovení tří katecholaminů v lidské plasmě s vysokou citlivostí, reprodukovatelností a širokým dynamickým rozsahem. Studie popisuje optimalizaci přípravy vzorku, chromatografických podmínek a hmotnostně spektrometrických parametrů.

Použitá metodika a instrumentace

Pro přípravu vzorku byly využity:

• Proteinová precipitace s 0,5 % kyselinou mravenčí v acetonitrilu
• Odstranění lipidů kartridží Agilent Captiva NDLipids
• Schematické SPE s Agilent BondElut PBA (fenylboronátová fáze)

Chromatografie:

• HPLC: Agilent 1290 Infinity LC s column thermostat
• Kolona: Agilent Pursuit PFP (2 × 150 mm, 3 µm) + MetaGuard
• Mobilní fáze: voda a methanol s 1 mM NH4F, gradient 0–95 % methanolu
• Teplota kolony 40 °C, objem injekce 20 µL, tok 0,3 mL/min

Hmotnostní spektrometrie:

• Agilent 6460 Triple Quad s technologií Jet Stream ESI+
• MRM přechody s deuterovanými interními standardy
• Nastavení: gas temp. 300 °C, sheath gas 400 °C, kapilární napětí 2 500 V

Hlavní výsledky a diskuse

Linearity kalibračních křivek (5–2 500 pg/mL) dosáhla R² > 0,9997. Mezi-denní i intra-denní přesnost měla CV < 5 %. Matricové efekty byly 42–119 % a průměrné výtěžnosti SPE 56–59 %, kompenzované interními standardy. Chromatografické rozlišení zajistilo oddělení katecholaminů a isobarických interferentů.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda nabízí:

• Vysokou citlivost a selektivitu pro klinickou a farmakologickou aplikaci
• Široký dynamický rozsah vhodný pro normální i patologické koncentrace
• Dobrou reprodukovatelnost a automatizovatelné přípravy vzorku

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se integrace mikrofluidních SPE modulů pro další miniaturizaci, online spekta analýzy v reálném čase či rozšíření panelu analýz o metabolity katecholaminů. Vznikají příležitosti pro telemedicínské aplikace a biobankování vzorků.

Závěr

Popsaná LC/MS/MS metoda se osvědčila jako spolehlivý analytický nástroj pro kvantifikaci norepinefrinu, epinefrinu a dopaminu v lidské plasmě. Kombinace selektivní přípravy vzorku, stabilních interních standardů a pokročilé hmotnostní spektrometrie umožňuje široké klinické a výzkumné nasazení.

Reference

1. Whiting MJ. Simultaneous measurement of urinary metanephrines and catecholamines by liquid chromatography with tandem mass spectrometric detection. Ann Clin Biochem. 2009;46:129–136.
2. Agilent Technologies. Phenylboronic Acid (PBA) Solid Phase Extraction Mechanisms and Applications. Technical Overview SI-02442. 2010.