Optimizing System Dispersion on the Agilent 1290 Infinity II LC

Význam tématu

Minimalizace systémové disperze v kapalinové chromatografii je klíčová pro dosažení vysoké rozlišovací schopnosti a kapacity sloupce. V ultravysoce výkonných UHPLC aplikacích, zejména při ultrarychlém a isokratickém režimu na malých vnitřních průměrech kolonek, vede snížení mrtvého objemu k výrazně užším a ostřejším píkům, kratší době analýzy a vyšší citlivosti.

Cíle a přehled studie

Technická přehledová studie porovnává Agilent 1290 Infinity II LC vybavený Ultralow Dispersion Kit se standardní konfigurací se 0,12 mm kapilárami a konkurenčním systémeem. Hlavním cílem bylo vyhodnotit systémovou disperzi, počet teoretických plat a pikovou kapacitu v isokratických i gradientních separacích.

Použitá metodika a instrumentace

Všechny experimenty proběhly na Agilent 1290 Infinity II LC sestavě zahrnující pumpu Highspeed (G7120A), multisampler s vyměnitelným sedlem jehly (G7167B), multikolonový termostat (G7116B), diode array detektor s Ultralow Dispersion Max-Light cartridgí (G7117B) a Ultralow Dispersion Kit (p/n 5067-5963) s kapilárami 0,075 mm id a A-Line Quick Turn fittingy. Software OpenLAB CDS ChemStation C.01.07 sloužil k akvizici a vyhodnocení dat. Metodicky se určovala systémová disperze injekcí kofeinu v PEEK kapiláře, isokratická separace ftalátů a gradientní separace směsi šesti anestetik podle standardních výpočtových rovnic.

Hlavní výsledky a diskuse

Ultralow Dispersion Kit snížil systémovou disperzi z 6,5 µL na 3 µL (poloviční hodnota) a 5σ šířku z 16 µL na 7 µL. V isokratické separaci došlo k nárůstu počtu teoretických plat až o 141 % pro dimetylftalát a 50 % pro dietylftalát oproti standardním 0,12 mm kapilárám. Gradientní separace anestetik vykázala zvýšení pikové kapacity až o 72 % oproti konkurenčnímu systému. Výsledky potvrzují výrazné zúžení píků, vyšší rozlišovací schopnost a efektivitu separace.

Přínosy a praktické využití metody

• Vyšší rozlišovací schopnost a kapacita v ultrarychlých a isokratických analýzách
• Snížení doby analýzy a spotřeby mobilní fáze
• Vhodné pro farmaceutické, QC/QA a průmyslové analytické aplikace
• Možnost práce s omezenými objemy vzorku a vysokou průtokovou rychlostí

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se další miniaturizace kapilár, integrace s hmotnostní spektrometrií, vývoj inteligentních fittingů s nulovým mrtvým objemem, automatizace mikroproudových aplikací a implementace digitálních kompenzačních algoritmů pro optimalizaci disperze.

Závěr

Agilent 1290 Infinity II LC s Ultralow Dispersion Kit dosahuje minimální systémové disperze a maximální chromatografické výkonnosti. Doporučuje se zejména pro ultrarychlé a isokratické analýzy na malých vnitřních průměrech kolonek. Pro standardní kolony s větším průměrem je použití omezeno zvýšenou zpětnou tlakem.

Reference

1. Agilent A-Line UHPLC Fittings Agilent Technologies Technical Overview publication number 5991-5525EN 2015
2. Schneider S Agilent 1290 Infinity LC System Applications requiring the Agilent Ultralow Dispersion Kit Agilent Technologies Application Note 5991-0826EN 2012
3. Scientific poster from other vendor presented at 38th Symposium of HPLC 2011