Comprehending COVID-19: Using the Atlantis PREMIER BEH C18 AX Mixed-Mode Column for the Analysis of Umifenovir

Význam tématu

Umifenovir, antivirotikum široce zkoumané v léčbě chřipky, se stalo předmětem studií i pro terapii onemocnění COVID-19. Precizní chromatografická analýza tohoto léčiva je zásadní pro farmakokinetické studie, kontrolu kvality i vývoj nových terapeutických protokolů. Mixed-mode chromatografie umožňuje kombinovat různé retenční mechanismy a zlepšit separaci ionizovatelných látek, což přináší významné výhody v oblasti bioanalytických metod.

Cíle a přehled studie

Cílem studie bylo porovnat chromatografickou odezvu umifenoviru na mixed-mode koloně Atlantis PREMIER BEH C18 AX s konvenční reverzní fází ACQUITY UPLC HSS T3. Studie se zaměřila na šířku špiček, symetrii, doby zadržení a celkovou selektivitu při stejných isokratických podmínkách.

Použitá metodika a instrumentace

Pro analýzu byl použit systém ACQUITY UPLC H-Class Bio spojený s PDA detektorem ACQUITY UPLC. Jako mobilní fáze sloužil 10 mM amonium formiát, pH 3,0, s 30 % acetonitrilu. Hlavní parametry:

• Kolony: Atlantis PREMIER BEH C18 AX (1,7 µm, 95 Å, 2,1×50 mm), ACQUITY UPLC HSS T3 (1,8 µm, 100 Å, 2,1×50 mm)
• Teplota kolony 30 °C, vzorek 100 µg/mL umifenoviru ve 0,1 % kyselině mravenčí/50 % acetonitril
• Průtok 0,3 mL/min, objem injekce 1 µL, teplota vzorku 12 °C

Hlavní výsledky a diskuse

Mixed-mode povrch kolony Atlantis PREMIER BEH C18 AX vykazuje při pH 3 pozitivní náboj, což vede k odpuzování protonovaného umifenoviru a snížené retenci. Při hmotnostní zátěži 0,1 µg bylo zjištěno:

• Šířka špičky: 6,9 s na mixed-mode koloně vs. 59 s na HSS T3
• Hodnota faktoru retence: cca 39 na HSS T3, snížení retence zvýšením acetonitrilu na 40 %, avšak špičky zůstaly přibližně o 50 % širší než na mixed-mode
• USP faktor špičatosti: 1,5 na Atlantis PREMIER BEH C18 AX vs. >2 na HSS T3

Výsledky potvrzují, že kombinovaná anion-výměnná a reverzní fáze poskytuje ostřejší a symetričtější špičky pro základní sloučeniny.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda nabízí:

• Zkrácené doby analýzy díky rychlejší eluci
• Vylepšenou špičatost a symetrii pro přesnější kvantifikaci
• Širokou možnost optimalizace prostřednictvím úpravy pH a složení mobilní fáze
• Komplementaritu k tradičním reverzním fázím při vývoji metod pro různé typy látek

Budoucí trendy a možnosti využití

S rozvojem mixed-mode technik lze očekávat:

• Rozšířené využití pro komplexní bioanalytické a farmakokinetické studie
• Automatizované screeningy kolon pro rychlejší vývoj metod
• Integraci s vysokorychlostními UPLC systémy pro další zkrácení analýz
• Adaptaci na různé třídy sloučenin včetně peptidů a oligonukleotidů

Závěr

Atlantis PREMIER BEH C18 AX mixed-mode kolona nabízí jedinečnou selektivitu a výrazně vylepšenou chromatografickou odezvu pro umifenovir ve srovnání s konvenční reverzní fází. Díky ostřejším špičkám a flexibilní optimalizaci podmínek je vhodná pro bioanalytické aplikace a vývoj nových metod.

Reference

1. Liu C. et al. Research and Development on Therapeutic Agents and Vaccines for COVID-19 and Related Human Coronavirus Diseases. ACS Central Science 2020, 6(3), 315-331.
2. Walter T.H. et al. A New Mixed-Mode Reversed-Phase/Anion-Exchange Stationary Phase Based on Hybrid Particles. Waters Application Note 720006742EN.
3. Iraneta P.C. et al. A Review of Waters Hybrid Particle Technology. Charged Surface Hybrid Technology. Waters White Paper 720003929EN, 2011.