A Fast and Sensitive LC/MS/MS Method for Quantitation of Fosfomycin in Human Plasma with HILIC Chromatography

Význam tématu

• Fosfomycin je širokospektrální antibiotikum používané k léčbě infekcí močových cest a rezistentních patogenů
• Kvantifikace koncentrace v plazmě je klíčová pro farmakokinetické studie a optimalizaci terapie

Cíle a přehled studie

• Vyvinout rychlou a citlivou LC/MS/MS metodu s HILIC chromatografií pro stanovení fosfomycin v lidské plazmě
• Ověřit linearitu, citlivost, přesnost, opakovatelnost, recovery a matrix effect metody

Použitá metodika a instrumentace

• Příprava vzorku: precipitace bílkovin acetonitrilem a metanolem (1:1) v poměru 1:4 k plazmě, centrifugace, filtrace 0,22 mikronu a ředění v 5 mM roztoku amonného acetátu
• Chromatografie: isokratický režim na Shim pack GIS HILIC koloně (150 x 3,0 mm, 3 µm) s mobilní fází 5 mM amonný acetát a acetonitril (10 procent) při průtoku 0,3 ml za minutu
• Hmotnostní spektrometrie: Shimadzu LCMS-8060 s ionizací ESI v negativním módu, MRM přechody 137,05>79 pro fosfomycin a 140,00>79 pro interní standard fosfomycin-13C3 benzylamin
• Kalibrace: rozsah 0,02 až 6 ppm ve vzorcích, odpovídá 1 až 300 ppm v plazmě po ředění faktorem 50

Hlavní výsledky a diskuse

• Linearita kalibrační křivky s korelací R2 0,999 v rozsahu 0,02 až 6 ppm
• Nižší kvantifikační limit LLOQ 0,02 ppm, signál šum nad 10 a RSD pod 8 procent
• Recovery 60,7 až 81,2 procent v první plazmě a 63,8 až 77,5 procent ve druhé plazmě
• Matrix effect 52,2 až 74,8 procent pro první plazmu a 64,4 až 76,5 procent pro druhou plazmu
• Přesnost a opakovatelnost QC vzorků v mezích ±15 procent s RSD pod 5 procent

Přínosy a praktické využití metody

• Analýza pod 3 minuty pro vysokou propustnost
• Vysoká citlivost a reprodukovatelnost výsledků
• Vhodná pro farmakokinetické studie, terapeutický drug monitoring a QA QC v biomedicínských laboratořích

Budoucí trendy a možnosti využití

• Rozšíření metody na jiné biologické matrice například moč nebo tkáňové extrakty
• Automatizace přípravy vzorků a implementace vysokopropustných systémů
• Vývoj multiplexních metod pro paralelní stanovení více antibiotik

Závěr

• Navržená metoda je rychlá, citlivá a přesná pro kvantifikaci fosfomycin v lidské plazmě
• Splňuje požadavky pro farmakokinetické a klinické aplikace

Reference

• Daryl Kim Hor Hee Zhi Wei Edwin Ting Lawrence Soon U Lee Jie Xing Kelvin Loh Shun Cheng Zhaoqi Zhan Asms 2017 ThP 079
• Fekade Bruck Sime Adam Johnson Sarah Whalley Anahi Santoyo Castelazo A Bruce Montgomery Kathie Ann Walters Jeffrey Lipman William W Hope Jason A Roberts Antimicrobial Agents and Chemotherapy Jan 2017 Vol 61 Issue 1 e01763-16