<h3>Kapalinová chromatografie (HPLC/UHPLC)</h3>
<h3>Ústav chemie potravin a biotechnologií, FCH, VUT v Brně</h3>
<ul>
<li><a href="https://lcms.cz/products/155">Agilent 1260 Infinity HPLC</a></li>
</ul>
Laboratoř Ústavu chemie potravin a biotechnologií (UCHPBT) na Fakultě chemické VUT v Brně byla vybavena kapalinovým chromatografem <a href="https://lcms.cz/library?search=1260&amp;mainauthorItems=10">Agilent 1260 Infinity</a> v rámci projektu „Modernizace areálu VUT v Brně Purkyňova 118“, který byl financován z prostředků EU a státního rozpočtu ČR prostřednictvím Operačního programu Výzkum a vývoj pro inovace (prioritní osa 4). V Laboratoři separačních metod na UCHPBT je komplexně řešena problematika analýzy potravin.
V posledních letech ve spolupráci s Výzkumným a šlechtitelským ústavem ovocnářským Holovousy byla charakterizována řada nových odrůd angreštů, rybízů, černého bezu a jiných netradičních druhů ovoce z hlediska obsahu biologicky aktivních látek. Velký důraz je kladen na analýzu polyfenolických látek a organických kyselin ve vínech a v pivě za účelem sledování autenticity těchto potravin, sledovány jsou metabolity vznikající mikrobiálním zpracováním různých druhů odpadů nebo interakce léčiv s hydrogely. Kapalinový chromatograf Agilent 1260 Infinity díky svým parametrům a také díky dvěma detektorům (DAD a ELSD) rozšířil aplikační možnosti laboratoře a celkově zlepšil výkonnostní ukazatele již zavedených metod v laboratoři.
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/HPST_doc_Ing_Pavel_Divis_Ph_D_Ustav_chemie_potravin_a_biotechnologii_FCH_VUT_v_Brne_bd5f666129/HPST-doc.-Ing.-Pavel-Divis-Ph.D.-Ustav-chemie-potravin-a-biotechnologii-FCH-VUT-v-Brne.jpg" alt="HPST: doc. Ing. Pavel Diviš, Ph.D. (Ústav chemie potravin a biotechnologií, FCH, VUT v Brně)"/>
<h3>Ústav mléka, tuků a kosmetiky, FPBT, VŠCHT v Praze</h3>
<ul>
<li>Agilent 1260 Infinity Bio-inert HPLC</li>
</ul>
Laboratoř fyzikálně chemické analýzy Ústavu mléka, tuků a kosmetiky, Fakulta potravinářské a biochemické technologie, Vysoká škola chemicko-technologická v Praze, je určena pro analýzu a separace širokého spektra přírodních látek jako tuků, cukrů a bílkovin v rámci studentské vědecko-výzkumné činnosti při řešení diplomových a disertačních prací.
Laboratoř lze rozdělit na tři části.
<ul>
<li>První se zabývá pouze analýzou lipidů pomocí systémů plynové chromatografie (GC) s MS a FID detektory. </li>
<li>Druhá část je určena pro analýzu biomolekul s pomocí vysokoúčinné kapalinové chromatografie (HPLC). </li>
<li>Třetí část se využívá pro preparativní separace bílkovin.</li>
</ul>
V rámce projektu KvaLab bylo v roce 2015 do laboratoře nainstalováno několik nových systémů, jeden z nich je <a href="https://lcms.cz/library?mainauthorItems=10&amp;search=bio&amp;instrumentationItems=27">biokompatibilní HPLC Agilent Infinity 1260</a>. Tento systém umožňuje využití klasických HPLC metod jako RP-HPLC a také separace s pomocí bio SEC kolon a mobilních fází se zvýšenou koncentrací solí. Kromě toho dává kvaternární pumpa a <a href="https://lcms.cz/library?mainauthorItems=10&amp;search=Buffer%20Advisor%20Software&amp;instrumentationItems=27">Buffer Advisor Software</a> možnost automatického míchání pufrů pro provedení rychlého screeningu na anion výměnných kolonách. 
Automatický sběrač frakcí a přepínač kolon při takovém screeningu dovoluje udělat následnou rychlou analýzu odebraných frakcí pouze přesunutím držáku se vzorky do autosampleru a jednoduchým přepnutím kolony. 
Pokud je třeba analyzovat vzorky sacharidů nebo triglyceridy, efektivním doplňkem k takovému systému je detektor <a href="https://lcms.cz/library?mainauthorItems=10&amp;search=ELSD%201290&amp;instrumentationItems=27">1290 Infinity II ELSD</a>. Díky této multifunkční sestavě je laboratoř schopna pokrýt širokou škálu potřeb laboratoře.
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/HPST_Ing_Jan_Kovar_HPST_Mgr_Volodymyr_Skalka_M_Sc_Ustav_mleka_tuku_a_kosmetiky_FPBT_VSCHT_v_Praze_63ff9dad44/HPST-Ing.-Jan-Kovar-(HPST)-Mgr.-Volodymyr-Skalka-MSc.-Ustav-mleka-tuku-a-kosmetiky-FPBT-VSCHT-v-Praze.jpg" alt="HPST: Ing. Jan Kovář (HPST), Mgr. Volodymyr Skalka, MSc. (Ústav mléka, tuků a kosmetiky, FPBT, VŠCHT v Praze)"/>
<h3>Ústav chemie a biochemie, AF, Mendelova Univerzita v Brně</h3>
<ul>
<li><a href="https://lcms.cz/products/157">Agilent 1260 Infinity Analytical SFC</a></li>
</ul>
Laboratoř Metabolomiky sekundárních metabolitů, Ústav chemie a biochemie, CEITEC Mendelova univerzita v Brně, je zaměřena na studium sekundárních metabolitů.
Hlavní část výzkumu je věnována především vývoji nových separačních metod. Laboratoř disponuje moderními extrakčními technikami jako jsou SFE, PLE, MAE. Část výzkumu je věnována kombinovaným technikám SFE/SPE a PLE/SPE. 
Hlavní část výzkumu je směřována do identifikace a kvantifikace sekundárních metabolitů napříč rostlinnou říší. Pro tuto část výzkumu disponuje laboratoř hmotnostní spektrometrií (HRMS, QQQ) doplněnou o ambientní techniky (DART, DESI, AP MALDI). Chromatografická část disponuje systémy rychlé (RRLC), ultra (UHPLC) a 2D chromatografie.
V loňské roce byla laboratoř doplněna o superkritickou fluidní chromatografii <a href="https://lcms.cz/library?mainauthorItems=10&amp;instrumentationItems=38">Agilent 1260 Infinity SFC</a>. V současné době je SFC využívána pro monitoring karotenoidních barviv v řasách. V následujícím období se laboratoř zaměří na separaci vybraných stereoizomerů ve vyšších rostlinách. Superkritická fluidní chromatografie byla instalována začátkem roku 2015 a je využívána pro monitoring vybraných sekundárních metabolitů v rostlinné říši.
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/HPST_Ing_Aneta_Strejckova_prof_RN_Dr_Borivoj_Klejdus_Ph_D_Ing_Jan_Kovar_HPST_Ing_Romana_Bacova_Ustav_chemie_a_biochemie_AF_Mendelova_Univerzita_v_Brne_30a5fbe9a7/HPST-Ing.-Aneta-Strejckova-prof.-RNDr.-Borivoj-Klejdus-Ph.D.-Ing.-Jan-Kovar-(HPST)-Ing.-Romana-Bacova-Ustav-chemie-a-biochemie-AF-Mendelova-Univerzita-v-Brne.jpg" alt="HPST: Ing. Aneta Strejčková; prof. RNDr. Bořivoj Klejdus, Ph.D.; Ing. Jan Kovář (HPST); Ing. Romana Bačová (Ústav chemie a biochemie, AF, Mendelova Univerzita v Brně)"/>
<h3>Ústav konzervace potravin, FPBT, VŠCHT v Praze</h3>
<ul>
<li><a href="https://lcms.cz/products/155">Agilent 1260 Infinity HPLC</a></li>
</ul>
Ústav konzervace potravin, Fakulta potravinářské a biochemické technologie, Vysoká škola chemicko-technologická v Praze, se zabývá hlavně problematikou potravin, a to vybranými potravinářskými technologiemi (ovoce, zelenina, maso, vejce, lahůdky aj.), balením potravin, kvalitou a autenticitou potravin, určením doby trvanlivosti výrobků, systémy jakosti v oblasti potravinářství apod. V rámci ústavu působí i nezávislá obalová laboratoř, která zkoumá vlastnosti obalových materiálů, hodnotí jejich zdravotní nezávadnost, provádí celkové i speciální migrační testy aj. 
Významnou aktivitou je pedagogická činnost včetně vedení bakalářských, diplomových a disertačních prací. Ústav konzervace potravin tak vychovává specialisty pro potravinářské závody, kontrolní laboratoře, státní správu, kontrolní orgány apod. Vědecká činnost ústavu je zaměřena zejména na aplikovaný výzkum v oblasti potravinářství. 
Ústav konzervace potravin poskytuje servisní služby v oblasti poradenství, technologických zkoušek, vývoji nových výrobků, zjišťování příčin defektů apod. V neposlední řadě jsou jako servis, zejména pro výrobce potravin, zajišťovány i akreditované analytické a mikrobiologické rozbory.
Kapalinová chromatografie je v laboratořích Ústavu konzervace potravin používána pro akreditované i neakreditované rozbory vybraných složek potravin a kontaminantů. Na přístrojích jsou řešeny vědecké úkoly ústavu včetně bakalářských diplomových a disertačních prací. Mezi vybrané rozbory lze zmínit: konzervanty, organické kyseliny, sacharidy, 5-HMF, floridzin, kofein, theobromin, morfin atd.
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/HPST_doc_Ing_Ales_Rajchl_Ph_D_Ustav_konzervace_potravin_FPBT_VSCHT_v_Praze_8090fbe91f/HPST-doc.-Ing.-Ales-Rajchl-Ph.D.-Ustav-konzervace-potravin-FPBT-VSCHT-v-Praze.jpg" alt="HPST: prof. Ing. Aleš Rajchl, Ph.D. (Ústav konzervace potravin, FPBT, VŠCHT v Praze)"/>

Zpátky do minulosti: HPLC systémy Agilent Technologies u našich zákazníků

Vitamin D hraje důležitou roli v metabolických cestách, včetně homeostázy vápníku a fosforu, a je prekurzorem steroidních hormonů. Bohatým zdrojem vitaminu D jsou játra, ryby, vejce nebo mléčné výrobky. V některých rozvojových zemích jsou mléko a oleje na vaření, jako nákladově efektivní řešení prevence podvýživy, o vitamin D obohacovány. V rostlinách se nachází jako ergokalciferol (vitamin D₂) a u zvířat jako cholekalciferol (vitamin D₃).
Kvantitativní analýza založená na LC/MS/MS je pro kvantifikaci populárnější než tradiční analytické metody a to kvůli lepší specificitě a vyšší citlivosti. Analýza D₂ a D₃ v krmných směsích pro zvířata, potravinách rostlinného původu nebo potravinách o vitamin D obohacovaných uměle však čelí výzvám, jako je rychlá degradace a špatná reprodukovatelnost. Složitost analýzy se dále zvýšuje v důsledku rozmanitosti mléka a významným matricovžm efektům. Vyvinutá LC/QQQ metodika prokázala citlivost na úrovni 0,4 ng/g, má vysokou reprodukovatelnost a je vhodná nejen pro rutinní laboratoře, které tyto testy provádějí.
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/Struktura_vitaminu_D_a_D_7c72f09e74/Struktura-vitaminu-D-a-D.png" alt="Struktura vitaminu D₂ a D₃"/>
<h3>Úvod</h3>
Pro analýzu vitaminů D₂ a D₃ existuje řada publikovaných metod. Vzorky potravin s významnými matričními efekty se v LC/MS/MS analyzují pomocí APCI iontového zdroje. Přes veškeré úsilí ale představuje rozmanitost vzorků mléka s různým obsahem tuku pro analytická data potenciální hrozbu. Zmýdelnění ethanolickým hydroxidem draselným je důležité při manipulaci s proměnlivým poměrem tuků, zatímco přidání pyrogallolu je zásadní, aby se zabránilo oxidaci analytů během opakovaných kroků promývání. Derivatizace pomocí 4-fenyl-1,2,4-triazolin-3,5-dionu (PTAD) je užitečná ke zvýšení citlivosti obou analytů, zatímco pro analýzu výtěžnosti je zásadní použití deuterovaných vnitřních standardů (IS).
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/Redici_protokol_pro_pripravu_standardu_1d18d1d115/Redici-protokol-pro-pripravu-standardu.png" alt="Ředicí protokol pro přípravu standardů"/>
<h3>Instrumentace</h3>
<ul>
<li><a href="https://lcms.cz/products/154">Agilent 1290 Infinity II</a> High Speed Pump</li>
<li>Agilent 1290 Infinity II vial sampler</li>
<li>Agilent 1290 Infinity II MCT</li>
<li><a href="https://lcms.cz/products/163">Agilent 6470 LC/TQ</a> with AJS ion source</li>
</ul>
<h5>Parametry HPLC metody</h5>
<ul>
<li>Kolona: <a href="https://lcms.cz/products/153">Agilent InfinityLab Poroshell 120</a> EC-C18 (p/n 699975-302)</li>
<li>Teplota kolony: 10 °C</li>
<li>Objem nástřiku: 10 μL</li>
<li>Teplota autosampleru: 10 °C</li>
<li>Proplachovací roztok: Metanol/Voda (80/20)</li>
<li>Mobilní fáze: A) 0,1% kyseliny mravenčí ve vodě; B) 100% methanol</li>
<li>Průtok: 300 μL/min</li>
</ul>
<h5>Parametry LC/TQ systému</h5>
<ul>
<li>Ionizační mód: AJS (+ ve)</li>
<li>Nebulizační plyn: 45 psi</li>
<li>Sušící plyn: 5 l/min při 300 °C</li>
<li>Vyhřívací plyn: 11 l/min při 250 °C</li>
<li>Napětí na kapiláře: 3500 V</li>
<li>Napětí trysky: 500 V</li>
<li>CAV: 5 V</li>
<li>Dwell time: 50 ms</li>
<li>Rozlišení: Unit/Unit</li>
</ul>
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/Parametry_MRM_pro_analyzu_vitaminu_D_a_D_b1018cbbbb/Parametry-MRM-pro-analyzu-vitaminu-D-a-D.png" alt="Parametry MRM pro analýzu vitaminu D₂ a D₃"/>
<h3>Výsledky a diskuse</h3>
Vyvinutá metoda je vhodná pro kvantifikaci dvou forem vitaminu D: ergokalciferolu a cholekalciferolu. Bylo zjištěno, že metoda ESI-LC/MS/MS založená na MRM je specifická pro dva analyty v mléčné matrici. Kromě použití interních standardů se při sledování nízkých mezí detekce, vysoké citlivosti a vysoké výtěžnosti ukázala být užitečná příprava vzorků založená na zmýdelnění mléčné matrice s následnou derivatizací.
Příprava vzorků napříč různými typy mléka z trhu ukázala slušnou výtěžnost obou analytů. Tuto metodu mohou tedy použít výzkumné, kontrolní nebo komerční zkušební laboratoře pro kvantitativní odhad obsahu vitaminů D2 a D3 při obohacování potravit. 
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/Citlivost_analyzy_vitaminu_D2_a_D3_0_4_ppb_v_matrici_oproti_blanku_8941a94b71/Citlivost-analyzy-vitaminu-D2-a-D3-(04-ppb-v-matrici-oproti-blanku).png" alt="Citlivost analýzy vitamínů D₂ a D₃ (0,4 ppb v matrici oproti blanku)"/>
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/Prekryti_ruznych_koncentraci_vitaminu_D2_a_D3_2d2f8f47da/Prekryti-ruznych-koncentraci-vitaminu-D2-a-D3.png" alt="Překrytí různých koncentrací vitamínů D₂ a D₃"/>

Simultánní stanovení vitaminu D₂ a D₃ v mléce

**Vzorky zelí byly extrahovány konvenčním přístupem SPE podle současné čínské GB metody 20769-2008. Získaný extrakt byl filtrován přes 0,22 um membránu. Následovala separace pomocí UHPLC <a href="https://lcms.cz/products/154">Agilent 1290 Infinity II</a> ve spojení s detektorem <a href="https://lcms.cz/products/164">Agilent 6545 LC/Q-TOF MS/MS</a> v režimu skenování Agilent All Ions MS/MS. **
Celkem 415 pesticidů v červeném zelí bylo hodnoceno s matricovými standardy v rozmezí koncentrací 1 až 200 μg/kg. Mez detekce pro screening (SDL) a mez kvantifikace (LOQ) pro většinu pesticidů byly nižší než 5 μg/kg, respektive 10 μg/kg. Lineární korelační koeficienty (R²) v koncentračním rozmezí byly u všech pesticidů vyšší než 0,99. Při naspikovaných úrovních 1 × LOQ, 2 × LOQ a 10 × LOQ se výtěžnost 413 ze 415 pesticidů pohybovala od 70 do 118,8%. Jen dva pesticidy dosáhly výtěžnosti v rozmezí 65 až 70% na úrovni 1 × LOQ. Relativní standardní odchylky byly u všech pesticidů nižší než 20%.
Tato metoda byla použita k provedení screeningu neznámých reziduí pesticidů a kvantitativního měření při účasti v programu zkoušek odborné způsobilosti EU pro screening pesticidů v roce 2019. Všechny oficiálně přítomné pesticidy byly správně identifikovány a přesně kvantifikovány. Výsledky ukazují, že metoda je velmi spolehlivá, schopná hledat neznáme pesticidy a je také schopná pesticidy kvantifikovat se současným získáváním údajů o přesné hmotě a to i na úrovni MS/MS fragmentů. 
Tím se při splnění screeningových kritérií výrazně zlepšuje propustnost vzorků pro analýzu reziduí pesticidů v červeném zelí. Tuto metodu lze rozšířit na další zeleninové a ovocné matrice.
<h3>Experimentální část</h3>
<h5>Podmínky HPLC separace:</h5>
<ul>
<li>UHPLC: [Agilent 1290 Infinity II](Agilent 1290 Infinity II)</li>
<li>Kolona: <a href="https://lcms.cz/products/293">Agilent ZORBAX</a> SB-C18 (100 mm × 2,1 mm, 3,5 μm</li>
<li>Mobilní fáze: A: 0,1% kyselina mravenčí/5 mM octan amonný; B: acetonitril</li>
<li>Teplota kolony: 40 ° C</li>
<li>Objem nástřiku: 5 μL</li>
<li>Průtok: 0,4 ml/min</li>
</ul>
<h5>Podmínky MS/MS detekce:</h5>
<ul>
<li>MS detektor: [Agilent 6545 LC/Q-TOF](Agilent 6545 LC/Q-TOF MS/MS) s Agilent Dual Jet Stream ESI</li>
<li>Polarita: Pozitivní ionizace</li>
<li>Rozsah MS skenování: m/z 50 až 1 000</li>
<li>Režim skenování: Agilent All Ions MS/MS screeningový pracovní postup</li>
<li>Referenční ionty: m/z 121,0509/922,0098</li>
</ul>
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/Identifikovane_slouceniny_pesticidu_v_neznamem_vzorku_cerveneho_zeli_z_nichz_kazda_je_uvedena_s_jednim_prekurzorovym_iontem_a_jednim_hlavnim_fragmentovym_iontem_vyssi_intenzita_pro_kvalifikaci_dd586f0993/Identifikovane-slouceniny-pesticidu-v-neznamem-vzorku-cerveneho-zeli-z-nichz-kazda-je-uvedena-s-jednim-prekurzorovym-iontem-a-jednim-hlavnim-fragmentovym-iontem-(vyssi-intenzita)-pro-kvalifikaci.png" alt="HPST/Agilent Technologies: Identifikované sloučeniny pesticidů v neznámém vzorku červeného zelí, z nichž každá je uvedena s jedním prekurzorovým iontem a jedním hlavním fragmentovým iontem pro kvalifikaci"/>
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/Extrahovane_iontove_chromatogramy_pro_kvantitativni_i_kvalitativni_ionty_kazde_identifikovane_pesticidni_slouceniny_ve_neznamem_vzorku_cerveneho_zeli_poskytnute_testem_odborne_zpusobilosti_EU_v_programu_rezidui_pestic_df0129d157/Extrahovane-iontove-chromatogramy-pro-kvantitativni-i-kvalitativni-ionty-kazde-identifikovane-pesticidni-slouceniny-ve-neznamem-vzorku-cerveneho-zeli-poskytnute-testem-odborne-zpusobilosti-EU-v-programu-rezidui-pestic.png" alt="HPST/Agilent Technologies: Extrahované iontové chromatogramy pro kvantitativní i kvalitativní ionty každé identifikované pesticidní sloučeniny v neznámém vzorku červeného zelí"/>
Identifikační číslo každého pesticidu je uvedeno v tabulce výše. U každého ID pesticidu je v levém grafu zobrazen iontový chromatogram pro kvantifikaci a v pravém grafu jsou přeloženy jak extrahované kvantitativní, tak kvalitativní iontové chromatogramy. 
<h3>Závěr</h3>
Tato aplikační poznámka popisuje metodu simultánního screeningu a kvantifikace 415 reziduí pesticidů v červeném zelí pomocí Agilent 6545 LC-Q/TOF. Screeningová metoda vyvinutá pro matici červeného zelí je citlivá a spolehlivá, přičemž většina SDL je na úrovni 5 ug/kg nebo méně.
Metoda je také přesná a robustní pro účely kvantifikace s většinou LOQs na nebo pod 10 μg/kg a RSD pod 20%. Tuto metodu lze také rozšířit o mnoho dalších matric potravin rostlinného původu pro kvalitativní a kvantitativní screening residuí pesticidů. 
<h3>Přehled <a href="https://lcms.cz/library?categoryItems=2&amp;mainauthorItems=10&amp;instrumentationItems=31&amp;date=2021-2021">nejnovějších LC/MS aplikací</a> Agilent Technologies pro oblast analýzy potravin</h3>
<ul>
<li>Quantitation of Amino Acids in Soy Flour, Dried Cow&#39;s Milk Powder, and Corn Silage by Triple Quadrupole LC/MS/MS | 2021 | LC/MS, LC/MS/MS, LC/QQQ
</li>
<li>Simultaneous Detection and Quantitation of 14 Water-Soluble Vitamins in a Supplement by LC/MS/MS Triple-Quadrupole | 2021 | LC/MS, LC/MS/MS, LC/QQQ
</li>
<li>Quantitation of Pesticide Residues in Milk Using the Agilent 6470 Triple Quadrupole LC/MS | 2021 | LC/MS, LC/MS/MS, LC/QQQ
</li>
<li>Simultaneous Screening and Quantification of Pesticide Residues in Red Cabbage | 2021 | LC/TOF, LC/HRMS, LC/MS, LC/MS/MS
</li>
<li>Quantitative Screening of Multiresidue Veterinary Drugs in Milk and Egg Using the Agilent 6495C Triple Quadrupole LC/MS | 2021 | LC/MS, LC/MS/MS, LC/QQQ
</li>
<li>Pesticide Analysis in Unique Commodities using the Agilent 6470 Triple Quadruopole LC/MS System | 2021 | LC/MS, LC/MS/MS, LC/QQQ
</li>
<li>Simultaneous Determination of Vitamin D2 and D3 in Milk | 2021 | LC/MS, LC/MS/MS, LC/QQQ
</li>
<li>Quantitation of Paraquat Residue in Milk Using the Agilent 6470 Triple Quadrupole LC/MS | 2021 | LC/MS, LC/MS/MS, LC/QQQ
</li>
<li>Analysis of 510 Pesticide Residues in Honey and Onion on an Agilent 6470 Triple Quadrupole LC/MS System | 2021 | LC/MS, LC/MS/MS, LC/QQQ
</li>
<li>Quantitative Analysis of 210 Veterinary Drugs in Organ Meat Using the Agilent 6470 Triple Quadrupole LC/MS | 2021 | LC/MS, LC/MS/MS, LC/QQQ
</li>
</ul>
<h3>Přehled <a href="https://lcms.cz/webinars?companyId=37">nejnovějších LC/MS webinářů</a> Agilent Technologies pro oblast analýzy potravin</h3>
<ul>
<li>Pesticides screening methodology in different food matrices using the LC/Q-TOF and MassHunter Screener Tool (Pá, 23.7.2021)
</li>
<li>Raise your Cannabis Knowledge with addition of an LC/MS IQ for Hemp Testing (St, 28.7.2021)
</li>
<li>Accurate Quantitation of Carotenoids and Fat-Soluble Vitamins in Food and Supplements by LC-MS/MS (Proběhlo St, 14.7.2021)
</li>
<li>LC-MS/MS: The key to analyzing PFAS in milk, infant formula, and related food ingredients (Proběhlo Po, 12.7.2021)
</li>
</ul>

Simultánní screening a kvantifikace reziduí pesticidů v červeném zelí

Biologická léčiva jsou makromolekulární látky, peptidy, bílkoviny nebo segmenty nukleových kyselin, při jejichž přípravě se používají živé organismy nebo jejich produkty. Výroba bioléčiv patří mezi nejpřísněji regulované procesy, které zajištují vznik vysoce účinného a funkčního produktu.
Pomocí analýzy rizik se provádí identifikace kritických proměnných (CQA - Critical Quality Attributes), ovlivňujících finální kvalitu výrobku. CQA jsou fyzikální, chemické, biologické a mikrobiologické vlastnosti a charakteristiky přípravku, které mají splňovat určený limit, rozmezí a distribuci tak, aby byla zajištěna požadovaná kvalita.
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/HPST_Nabidka_Bio_HPLC_kolon_Agilent_Technologies_a6ea4026d8/HPST-Nabidka-BioHPLC-kolon-Agilent-Technologies.png" alt="HPST: Nabídka BioHPLC kolon Agilent Technologies"/>
<h3>Kolony Agilent Bio-Monolith Protein A a Protein G pro stanovení titru protilátek</h3>
Afinitní chromatografie je metoda izolace biologicky aktivních látek, která využívá vysoce specifických molekulárních interakcí mezi proteiny (např. antigen/protilátka). Stacionární fáze kolon se připravují navázáním afinitního ligandu na pevný nosič. Agilent nabízí několik výjimečných afinitních produktů, včetně monolitických kolon pro izolaci a kvantifikaci monoklonálních protilátek (mAb).
<a href="https://lcms.cz/library?mainauthorItems=10&amp;search=Protein+A+G">Kolony Agilent Bio-Monolith Protein A a Protein G</a> jsou navrženy pro analytickou separaci všech lidských a myších podtříd Imunoglobulinu G (IgG). Poskytují rychlé a přesné kvantifikace titru protilátky a přečištění jejího malého množství pro další charakterizaci např. pomocí hmotnostní spektrometrie. Tyto monolitické kolony jsou tvořeny z poly(glycidyl methakrylát-ko-etylen dimetkrylátu) - s vrstvou Proteinu A nebo Proteinu G, izolovaného ze Staphylococcus aureus.
Kolony jsou kompatibilní s <a href="https://lcms.cz/products?category=39&amp;manufacturerItems=10">HPLC</a> a <a href="https://lcms.cz/products?category=40&amp;manufacturerItems=10">UHPLC</a> systémy, včetně Agilent 1100, 1200 a 1260 Bio-inertní kvartérní LC.
<blockquote>
<a href="https://eshop.labicom.cz/hledani?s=Monolith&amp;_submit=Odeslat&amp;do=searchForm-submit">Dostupné on-line v našem e-shopu</a>
</blockquote>
<blockquote>
<a href="https://lcms.cz/library?mainauthorItems=10&amp;search=monolith">Aplikační listy dostupné v knihovně LabRulez</a>
<ul>
<li>Bio-Monolith Protein G column - More Options for mAb Titer Determination</li>
<li>Robust, Reliable Recombinant Protein A Monolith Column for Antibody Titer Determination</li>
<li>mAb Titer Analysis with the Agilent Bio-Monolith Protein A Column</li>
<li>Cell Culture Optimization Using an Agilent Bio-Monolith Protein A Column and LC/MS</li>
<li>Cell Clone Selection Using the Agilent Bio-Monolith Protein A Column and LC/MS</li>
<li>Reducing Cycle Time for Quantification of Human IgG Using the Agilent Bio-Monolith Protein A HPLC Column</li>
<li>Agilent Bio-Monolith Protein A Monitors Monoclonal Antibody Titer from Cell Cultures</li>
<li>Agilent AdvanceBio Desalting-RP Cartridges for Online Desalting in 2D-LC/MS mAb Analysis</li>
<li>Protein A Affinity IgG Capture Followed by AdvanceBio SEC Aggregation Analysis</li>
<li>Biomolecule characterization workflow agilent bio-monolith protein a and protein g affinity columns</li>
</ul>
</blockquote>
<h3>Kolony Agilent AdvanceBio SEC - pro monitorování agregace proteinů</h3>
Profil nečistot bioterapeutik má v bezpečnosti léčiv stále větší význam. Přestože jsou agregáty přítomny v extrémně nízkých koncentracích, mohou mít velký dopad na kvalitu produktu. Pro kvantifikaci a monitorování agregace proteinů, oligonukleotidů a dalších komplexních biopolymerů, např. pro analýzu analogů inzulinu, je proto chromatografie založená na dělení dle velikosti částic (SEC - Size Exclusion Chromatography) ideální metodou. 
Výběrem sorbentu o určité velikosti pórů ovlivňujeme rozsah molekulových hmotností analytů, které můžeme měřit na zvoleném sorbetu (tzv. vylučovací limit kolony).
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/HPST_Size_Exclusion_SEC_kolony_Agilent_Advance_Bio_172b8e8f42/HPST-Size-Exclusion-(SEC)-kolony-Agilent-AdvanceBio.png" alt="HPST - Size Exclusion (SEC) kolony Agilent AdvanceBio"/>
<a href="https://eshop.labicom.cz/hledani?s=AdvanceBio+SEC+1.9&amp;_submit=Odeslat&amp;do=searchForm-submit">Kolony AdvanceBio SEC 1.9 μm</a> a 2.7 µm pro stanovení agregace mAb a fragmentovou analýzu. Tyto kolony zmírňují interakce analytů s povrchem z nerezové oceli. Vyznačují se nízkým vnitřním průměrem 2.1 mm pro průtoky 0.05 až 0.10 ml/min a jsou ideální pro náročné analýzy proteinů. Jejich inertní hydrofilní povrch umožňuje používat nižší koncentraci těkavých aditiv v mobilní fázi, což vede k minimalizaci nespecifických interakcí. Kolony z nerezové oceli PEEK-lined neobsahují aktivní kovová místa, což snižuje potřebu prekondicionovaní kolony - a šetří čas a množství vzorků.
<a href="https://eshop.labicom.cz/hledani?s=Bio+SEC-3&amp;_submit=Odeslat&amp;do=searchForm-submit">Agilent Bio SEC-3</a> - kolony se sférickými 3µm částicemi, pokrytými hydrofilní vrstvou (100 Å, 150 Å a 300 Å).
<a href="https://eshop.labicom.cz/hledani?s=Bio+SEC-5&amp;_submit=Odeslat&amp;do=searchForm-submit">Agilent Bio SEC-5</a> - kolony se sférickými 5µm částicemi, pokrytými hydrofilní vrstvou (100 Å, 150 Å, 300 Å, 500 Å, 1000 Å a 2000 Å).
<blockquote>
<a href="https://eshop.labicom.cz/hledani?s=Size+Exclusion&amp;_submit=Odeslat&amp;do=searchForm-submit">Dostupné on-line v našem e-shopu</a>
</blockquote>
<blockquote>
<a href="https://lcms.cz/library?search=advancebio+sec&amp;mainauthorItems=10">Aplikační listy dostupné v knihovně LabRulez</a>
<ul>
<li>Agilent Biocolumns - Critical Quality Attributes - Aggregate Compendium </li>
<li>Agilent AdvanceBio SEC columns for peptides and proteins </li>
<li>Analysis of Antibody Fragment-Drug Conjugates Using an Agilent AdvanceBio SEC 120 Å 1.9 µm PEEK-Lined Column </li>
<li>Surmounting the Challenges of Bispecific Antibody Characterization</li>
<li>Analysis of Nanobodies Agilent AdvanceBio SEC 120 Å 1.9 μm and AdvanceBio HIC Columns</li>
<li>High Resolution Size Exclusion Chromatography Analysis of Small Therapeutic Proteins</li>
<li>High-Resolution, High-Throughput Size Exclusion Chromatography Analysis of Monoclonal Antibodies Using an Agilent AdvanceBio SEC 200 Å 1.9 µm Column</li>
<li>Sensitive Native Mass Spectrometry of Macromolecules Using Standard Flow LC/MS</li>
<li>High Performance Size Exclusion Chromatography for Analysis of Covalent High Molecular Weight Insulin</li>
<li>Size Exclusion Chromatography Analysis of a Monoclonal Antibody and Antibody Drug Conjugate Using an Agilent AdvanceBio SEC 200 Å 1.9 µm Column</li>
<li>Size Exclusion Chromatography of Biosimilar and Innovator Insulin</li>
<li>Characterization of mAb aggregation</li>
<li>Size Exclusion Chromatography in the Presence of an Anionic Surfactant</li>
<li>Fast, High-Resolution Size Exclusion Chromatography of Aggregates in Biotherapeutics</li>
<li>Separate and Quantify Rituximab Aggregates and Fragments with High-Resolution SEC</li>
<li>Size Exclusion Chromatography Analysis of Antibody Drug Conjugates</li>
<li>Protein A Affinity IgG Capture Followed by AdvanceBio SEC Aggregation Analysis</li>
<li>Online 2D-LC Characterization of Monoclonal Antibodies with Size Exclusion and Weak Cation Exchange Chromatography</li>
<li>Analysis of PEGylated Proteins with Agilent AdvanceBio SEC columns</li>
<li>Quantitation of mAb and ADC Aggregation Using SEC and an Aqueous Mobile Phase</li>
<li>Comparison of Biosimilar and Innovator Monoclonal Antibody Rituximab Using the Agilent 1260 Infinity Bio-inert LC System and Agilent OpenLAB Match Compare Software</li>
<li>Does Tween 20 affect Monoclonal Antibody Separation?</li>
<li>Choosing the Right Calibration for the Agilent Bio SEC-3 Column</li>
<li>Analysis of Antibody Drug Conjugates Using SEC and Mass Spectrometry</li>
<li>Defining the Optimum Parameters for Efficient Size Separations of Proteins</li>
<li>Characterization of monoclonal antibodies on the Agilent 1260 Infinity Bio-inert Quaternary LC by Size Exclusion Chromatography using the Agilent BioSEC columns</li>
<li>Fast Separation of Monoclonal Antibody and Dimer by SEC with Agilent Bio SEC</li>
<li>Multiple Detector Approaches to Protein Aggregation by SEC</li>
</ul>
</blockquote>
<h3>HPLC Kolony s reverzní stacionární fází (SF), s částicemi &gt;150 Å pro stanovení intaktních proteinů</h3>
<h5>Kolony Agilent <a href="https://eshop.labicom.cz/hledani?filters%5bmanufacturers%5d=agilent-technologies&amp;s=PLRP-S+">PLRP-S</a> 1000 Å 5 μm</h5>
<ul>
<li>fáze na bázi poly(styrene/divinylbenzene) pro separaci biomolekul</li>
<li>teplotně i chemicky velice stabilní, rozsah pH 1 – 14, teplota až 200 °C</li>
<li>zrnitost od 3 do 50 µm</li>
</ul>
Absence zbytkových silanolových skupin umožňuje zlepšení tvaru píku. Hardware lemovaný PEEK kolony navíc minimalizuje riziko artefaktů - jako je oxidace - v důsledku sekundárních kovových interakcí.
<h5><a href="https://eshop.labicom.cz/hledani?s=AdvanceBio+RP-mAb&amp;_submit=Odeslat&amp;do=searchForm-submit">AdvanceBio RP-mAb</a> – pro analýzu monoklonálních protilátek</h5>
<h5><a href="https://eshop.labicom.cz/hledani?s=RRHD+300&amp;_submit=Odeslat&amp;do=searchForm-submit">ZORBAX RRHD – 300A</a> – pro UHPLC analýzy</h5>
<ul>
<li>max. tlak 1200bar – optimalizované pro <a href="https://lcms.cz/products/154">UHPLC 1290 Infinity</a>, vhodné pro další UHPLC/UPLC přístroje</li>
<li>12 selektivních fází, zrnitost 1.8 µm</li>
<li>snadný přechod z 3.5 a 5 µm díky stejné selektivitě fází</li>
</ul>
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/HPST_HPLC_kolony_s_reverzni_stacionarni_fazi_SPP_Superficially_Porous_Particles_TPP_Totally_Porous_2_m_Particles_06c0fbeb3c/HPST-HPLC-kolony-s-reverzni-stacionarni-fazi-(SPP-Superficially-Porous-Particles-TPP-Totally-Porous-2-m-Particles).png" alt="HPST: HPLC kolony s reverzní stacionární fází (SPP - Superficially Porous Particles, TPP - Totally Porous 2 µm Particles)"/>
<h5>ZORBAX 300 StableBond</h5>
HPLC kolony Agilent ZORBAX 300Å StableBond jsou ideální volbou pro reprodukovatelné separace proteinů a peptidů. Tyto kolony jsou k dispozici ve čtyřech stacionárních fázích: C18, C8, C3 a Diphenyl. 
<h5><a href="https://eshop.labicom.cz/hledani?s=Poroshell+300&amp;_submit=Odeslat&amp;do=searchForm-submit">Poroshell 300</a></h5>
<ul>
<li>velikost pórů 300 Å poskytuje vysokou účinnost separace</li>
<li>čtyři různé stacionární fáze - 300 SB-C18, 300 SB-C8, 300 SB-C3 a 300 Extend-C18</li>
<li>kolonu Poroshell 300 Extend-C18 lze použít při pH od 2 do 11</li>
<li>možná separace peptidů a proteinů až do 500 - 1 000 kDa při tlaku 400/600 bar</li>
</ul>
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/HPST_Agilent_Poroshell_300_HPLC_kolony_db23e88c0f/HPST-Agilent-Poroshell-300-HPLC-kolony.jpg" alt="HPST: HPLC kolony Agilent Poroshell 300"/>
<blockquote>
<a href="https://lcms.cz/library?mainauthorItems=10&amp;search=Reversed+Phase">Aplikační listy dostupné v knihovně LabRulez</a>
<ul>
<li>Ion-Pair Reversed-Phase Purification of De-Protected Oligonucleotides – Choice of Pore Size</li>
<li>Use Temperature to Enhance Oligonucleotide Mass Transfer and Improve Resolution in Ion-Pair RP HPLC</li>
<li>Improved Column Lifetime with Thermally Stable Polymer Columns for Oligonucleotide Ion-Pair RP HPLC</li>
<li>Efficient Monoclonal Antibody and Antibody Drug Conjugate Desalting Prior to Mass Spectrometry using AdvanceBio Desalting-RP Cartridges </li>
<li>Cell Clone Selection Using the Agilent Bio-Monolith Protein A Column and LC/MS </li>
<li>2D-LC as automated desalting tool for MSD analysis </li>
<li>Agilent AdvanceBio Desalting-RP Cartridges for Online Desalting in 2D-LC/MS mAb Analysis </li>
<li>Application of AdvanceBio Desalting - RP Cartridges for LC/MS Analysis of mAbs </li>
<li>Characterize Fab and Fc Fragments by Cation-exchange Chromatography </li>
<li>LC/MS Analysis of Intact Therapeutic Monoclonal Antibodies Using AdvanceBio RP-mAb</li>
<li>Fast and High Resolution Analysis of Intact and Reduced Therapeutic Monoclonal Antibodies</li>
<li>Identifying Monoclonal Antibody Mutation Sites Using 2D-LC with Q-TOF LC/MS</li>
<li>Separation of Native Monoclonal Antibodies and Identification of Charge Variants</li>
<li>Characterization of Glycosylation in the Fc Region of Therapeutic Recombinant Monoclonal Antibody</li>
<li>Intact Protein Analysis Using an Agilent 6550 Q-TOF Mass Spectrometer</li>
<li>Analysis of Monoclonal Antibody (mAb) Using Agilent 1290 Infinity LC System Coupled to Agilent 6530 Accurate-Mass Quadrupole Time-of-Flight (Q-TOF)</li>
<li>Accurate Mass Measurement for Intact Proteins using ESI-oa-TOF</li>
<li>Protein Confirmation Using the LC/MSD TOF and the Agilent TOF Protein Confirmation Software</li>
<li>Fast Separation of Large and Heterogeneous Proteins Using ZORBAX Poroshell C18, C8, and C3 Phases.</li>
<li>Effect of Flow Rate on Ultra-fast Separations of Proteins on Porous and Superficially Porous Particle Columns</li>
<li>Using Poroshell 300SB-C18 for High-Sensitivity, High-Throughput Protein Analysis on the Agilent LC/MSD</li>
<li>Fast Protein Separations Using Agilent Poroshell 300</li>
<li>LC/MS of Intact Adeno-Associated Virus (AAV) Capsid Proteins for Product Identity</li>
<li>Characterization of Viral Vector Particles Using the Agilent 6545XT AdvanceBio LC/Q-TOF</li>
</ul>
</blockquote>
<h3>Kolony s reverzní stacionární fází (SF), s částicemi &lt;150 Å pro mapování peptidů</h3>
Mapování peptidů lze použít ke komplexní identifikaci primární struktury proteinu, která umožnuje identifikaci fragmentů generovaných při štěpení proteinů pomocí enzymů, např. trypsinu. Různé proteiny poskytují různé peptidové „otisky prstů“.
<h5>AdvanceBio Peptide Mapping - Peptidové mapování</h5>
Kolony HPLC jsou uřčený pro identifikaci proteinů a stanovení posttranslačních modifikací. Kolony umožňují rychlou identifikaci aminokyselinové substituce/modifikace v primární sekvenci proteinu. Kolony jsou povrchově porézní a mají velikost pórů 120 Å, což je optimální pro analýzu peptidů produkovaných enzymatickým štěpením proteinů. 
<h5>AdvanceBio 2.7 μm EC-C18</h5>
<h5><a href="https://eshop.labicom.cz/hledani?s=AdvanceBio+peptide+plus&amp;_submit=Odeslat&amp;do=searchForm-submit">AdvanceBio Peptide Plus</a></h5>
<h5><a href="https://eshop.labicom.cz/hledani?s=ZORBAX+Extend&amp;_submit=Odeslat&amp;do=searchForm-submit">ZORBAX 300Extend-C18</a></h5>
<h5><a href="https://eshop.labicom.cz/hledani?s=AdvanceBio+Amino+Acid+Analysis&amp;_submit=Odeslat&amp;do=searchForm-submit">AdvanceBio Amino Acid Analysis</a> (AAA)</h5>
<blockquote>
<a href="https://lcms.cz/library?mainauthorItems=10&amp;search=Reversed+Phase">Aplikační listy dostupné v knihovně LabRulez</a>
<ul>
<li>High-Resolution Mapping of Drug Conjugated Peptides in an ADC Digest</li>
<li>Comparison of Biosimilar and Innovator Monoclonal Antibody Rituximab Using the Agilent 1260 Infinity Bio-inert LC System and Agilent OpenLAB Match Compare Software</li>
<li>High Resolution Glycopeptide Mapping of EPO Using an Agilent AdvanceBio Peptide Mapping Column</li>
<li>Separation of IgG Glycopeptides using HILIC-LC/MS in Comparison to RP-LC/MS</li>
<li>Peptide Mapping of Innovator and Biosimilar Monoclonal Antibody</li>
<li>Peptide Mapping: A Quality by Design (QbD) Approach</li>
<li>Making Peptide Mapping Routine with the Agilent 6545XT AdvanceBio LC/Q-TOF</li>
<li>Reversed-phase LC primary structure characterization workflow</li>
<li>High Resolution and Rapid Peptide Mapping of Monoclonal Antibody Using an Agilent 1290 Infinity UHPLC and an Agilent 6550 iFunnel Q-TOF LC/MS System</li>
<li>Fast and Efficient Peptide Mapping of a Monoclonal Antibody (mAb): UHPLC Performance with Superficially Porous Particles</li>
<li>Analysis of Amino Acids Derived Online Using an Agilent AdvanceBio AAA Column</li>
<li>Determination of Amino Acid Composition of Cell Culture Media and Protein Hydrosylate Standard</li>
</ul>
</blockquote>

BioHPLC kolony Agilent pro analýzy makromolekulárních látek - část 1

<a href="https://lcms.cz/article/1556">V první části</a> přehledového článku o Agilent BioHPLC kolonách pro analýzy makromolekulárních látek jsme se blíže podívali na možnosti a použití kolon typu Bio-Monolith Protein A a Protein G pro stanovení titru protilátek, AdvanceBio SEC pro monitorování agregace proteinů, kolony s reverzní stacionární fází pro stanovení intaktních proteinů nebo mapování peptidů.
<h3>Iontově výměnná chromatografie pro analýzy nabitých molekul</h3>
Přítomnost pozitivně a negativně nabitých skupin ve struktuře proteinu znamená, že proteiny jsou mnohonásobně nabité. Celkový kladný nebo záporný náboj molekuly závisí na hodnotě izoelektrického bodu peptidu či proteinu a na pH okolního prostředí. Některé peptidy či proteiny budou tedy při zvoleném pH kladně nabité, jiné záporně nabité. Této vlastnosti peptidů a proteinů se využívá při iontově výměnné chromatografii (IEC).
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/HPST_Iontove_vymenna_chromatografie_pro_analyzy_nabitych_molekul_2991b7b3a9/HPST-Iontove-vymenna-chromatografie-pro-analyzy-nabitych-molekul.png" alt="HPST: IEC/IEX chromatografie pro analýzy nabitých molekul"/>
<h5><a href="https://eshop.labicom.cz/hledani?s=Agilent+Bio+IEX&amp;_submit=Odeslat&amp;do=searchForm-submit">Agilent Bio IEX</a></h5>
Agilent Bio Ion-Exchange HPLC kolony jsou naplněny polymerními neporézními iontoměničovými částicemi. Byly vyvinuty pro separaci peptidů, oligonukleotidů a proteinů. Rodina Bio IEX nabízí fáze se silným katexem (SCX), slabým katexem (WCX), silným anexem (SAX) a slabým anexem (WAX). Všechny fáze Bio Ion-Exchange jsou k dispozici ve velikostech neporézních částic 1.7; 3; 5 a 10 μm. 
<h5><a href="https://eshop.labicom.cz/hledani?s=Agilent+Bio+mAb&amp;_submit=Odeslat&amp;do=searchForm-submit">Agilent Bio mAb</a></h5>
Kolony vyvinuté pro charakterizaci monoklonálních protilátek. Kolony Bio mAb jsou k dispozici ve velikostech 1.7 μm, 3 μm, 5 μm a 10 μm. Menší částice poskytuji vyšší rozlišení.
<h5><a href="https://eshop.labicom.cz/hledani?s=PL-SCX&amp;_submit=Odeslat&amp;do=searchForm-submit">PL-SCX</a></h5>
<h5><a href="https://eshop.labicom.cz/hledani?s=Bio-Monolith&amp;_submit=Odeslat&amp;do=searchForm-submit">Bio-Monolith</a></h5>
<blockquote>
<a href="https://lcms.cz/library?mainauthorItems=10&amp;search=bio+iex">Aplikační listy dostupné v knihovně LabRulez</a>
<ul>
<li>Anion Exchange Chromatography Workflow</li>
<li>Faster Separations Using Agilent Weak Cation Exchange Columns</li>
<li>Online 2D-LC Analysis of Complex N-Glycans in Biopharmaceuticals Using the Agilent 1290 Infinity 2D-LC Solution</li>
<li>Charge Profiling of 2AB-labelled N-linked Glycans</li>
<li>Cation Exchange Chromatography Workflow</li>
<li>Analysis of E.coli Tryptic Digest and Intact Protein Using the Agilent 1290 Infinity 2D-LC Solution with Diode Array Detection and Q-TOF LC/MS</li>
<li>Analysis of proteins by anion exchange chromatography</li>
<li>Optimizing Protein Separations with Agilent Weak Cation-Exchange Columns</li>
<li>High-resolution Analysis of Charge Heterogeneity in Monoclonal Antibodies Using pH-gradient Cation Exchange Chromatography</li>
<li>Combining small-scale purification and analysis of monoclonal antibodies on one instrument</li>
<li>Analysis of Intact and C-terminal Digested IgG1 on an Agilent Bio MAb NP5 Column</li>
<li>Seamless Method Transfer from a 1260 Infinity Bio-inert LC to a 1260 Infinity II Bio-inert LC</li>
<li>Application of AdvanceBio Desalting - RP Cartridges for LC/MS Analysis of mAbs</li>
<li>Characterize Fab and Fc Fragments by Cation-exchange Chromatography</li>
<li>Characterize mAb Charged Variants by Cation-exchange Chromatography</li>
<li>Simple Method Optimization in mAb Charge Variant Analysis using pH Gradients Generated from Buffer Advisor with Online pH and Conductivity Monitoring</li>
<li>pH Gradient Elution for Improved Separation of Monoclonal Antibody Charge Variants</li>
</ul>
</blockquote>
<h3>Kolony AdvanceBio využívající hydrofilní interakce (HILIC) pro analýzy glykanů</h3>
Glykoproteiny jsou proteiny s navázanými sacharidy. Proces, kterým se tyto sacharidy na protein navazují, se označuje jako glykosylace a je to nejčastější kotranslační nebo posttranslační modifikace proteinů. Tyto úpravy molekul ovlivňují její vlastnosti a mohou mít vliv na imunosupresi nebo naopak imunoaktivaci biopřípravků. 
Analýza N-Glycanu často zahrnuje označení uvolněných glykanů značkou, která umožní fluorescenční detekci (FLD) a také zvýšení ionizace pro hmotnostní spektrometrii (MS). Nejčastěji používanou značkou pro tento typ analýz je 2-aminobenzamid (2-AB).
<h5><a href="https://eshop.labicom.cz/hledani?s=AdvanceBio+Glycan+Mapping&amp;_submit=Odeslat&amp;do=searchForm-submit">**AdvanceBio Glycan Mapping **</a></h5>
<blockquote>
<a href="https://lcms.cz/library?mainauthorItems=10&amp;search=AdvanceBio+Glycan">Aplikační listy dostupné v knihovně LabRulez</a>
<ul>
<li>Analysis of Monoclonal Antibody N-glycans by Fluorescence Detection and Mass Selective Detection Using LC/MSD XT </li>
<li>Streamlined Workflows for N-Glycan Analysis of Biotherapeutics with LC/FLD/MS </li>
<li>Comparison of Relative Quantification of Monoclonal Antibody N-glycans Using Fluorescence and MS Detection </li>
<li>A Comprehensive Approach for Monoclonal Antibody N-linked Glycan Analysis from Sample Preparation to Data Analysis </li>
<li>Profiling Glycosylation of Monoclonal Antibodies at Three Levels Using the Agilent 6545XT AdvanceBio LC/Q-TOF </li>
<li>Fast and Efficient HILIC Methods for Improved Analysis of Complex Glycan Structures </li>
<li>A Novel HILIC Column for High Speed N-linked Glycan Analysis </li>
<li>Sensitive and Reproducible Glycan Analysis of Human Immunoglobulin G </li>
<li>Separation of IgG Glycopeptides using HILIC-LC/MS in Comparison to RP-LC/MS</li>
<li>N-Glycan Analysis of mAbs and Other Glycoproteins with UHPLC and Fluorescence DetectionThe Agilent 1290 Infinity Binary LC System with the Agilent AdvanceBio Glycan Mapping Column</li>
<li>Agilent Solutions for High-throughput N-linked Glycan Profiling from Biotherapeutics</li>
<li>Analysis of N-Linked Glycans from Antibody-Drug Conjugate (ADC) Using the Agilent AssayMAP Automated Sample Preparation and Agilent 1290 Infinity LC System</li>
</ul>
</blockquote>
<h3>Kolony AdvanceBio HIC (Hydrophobic Interaction Chromatography) využívající hydrofobní interakce pro analýzy např. intaktních nativních bílkovin</h3>
Výhodou této metody je minimalizace či úplné odstranění případné denaturace peptidů a bílkovin, která je velice častým problémem při použití reverzní chromatografie. HIC kolony mají výrazně nižší hustotu pokrytí nosiče než reverzní stacionární fáze. Dalším výrazným rozdílem HIC techniky od reverzní chromatografie je používání vodné mobilní fáze o vysoké iontové síle a neutrálním pH.
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/HPST_Kolony_Advance_Bio_HIC_Hydrophobic_Interaction_Chromatography_8cecde704a/HPST-Kolony-AdvanceBio-HIC-(Hydrophobic-Interaction-Chromatography).png" alt="HPST: Kolony AdvanceBio HIC (Hydrophobic Interaction Chromatography)"/>
<h5><a href="https://eshop.labicom.cz/hledani?s=AdvanceBio+HIC&amp;_submit=Odeslat&amp;do=searchForm-submit">AdvanceBio HIC</a></h5>
<blockquote>
<a href="https://lcms.cz/library?mainauthorItems=10&amp;search=HIC">Aplikační listy dostupné v knihovně LabRulez</a>
<ul>
<li>AdvanceBio HIC: a New Hydrophobic HPLC Column for Monoclonal Antibody (mAb) Variant Analysis </li>
<li>A New AdvanceBio HIC Column for Drug to Antibody Ratio (DAR) Analysis of Antibody Drug Conjugates (ADC)</li>
</ul>
</blockquote>
Pokud potřebnou kolonu nenaleznete, kontaktujte nás na e-mail (info@hpst.cz)

BioHPLC kolony Agilent pro analýzy makromolekulárních látek - část 2

Metoda poskytuje alternativní řešení k iontově výměné (IEX) nebo iontové chromatografie (IC) pro separaci polárních a iontových sloučenin. Metoda využívá chytrý a snadno použitelný systém, který těží z hlavních výhod systému <a href="https://lcms.cz/products/162">InfinityLab LC/MSD iQ</a> a softwaru <a href="https://lcms.cz/products/24">OpenLab CDS</a>.
<h3>Úvod</h3>
Analýza anorganických aniontů byla vždy v chromatografii s reverzní fází výzvou kvůli povaze polárních aniontů v relativně nepolárním prostředí. IEX a IC se obvykle používají pro analýzu malých aniontů, vyžadují delší časy ekvilibrace a analýzy, specifikcé chemikálie a konfigurace systémů a jsou náročnější na kompatibilitu s MS detektory.
<a href="https://lcms.cz/library?mainauthorItems=10&amp;search=hilic">HILIC</a> je robustní a spolehlivá metoda, kterou lze snadno implementovat v laboratoři, kde se již běžně používá chromatografie na reverzní fázi. HILIC je tak alternativní analytická metoda pro polární sloučeniny. Při použití HILIC jsou hlavními výhodami oproti IEX a IC jednoduché složení mobilní fáze (obvykle voda-acetonitril) bez silných kyselých nebo zásaditých přísad; jednoduché nastavení metody, kde není potřeba žádná dodatečná úprava, jako je regenerace nebo čištění systému; a možnost simultánní analýzy různých analytů (kationty, anionty a neutrální specie v jedné analytické analýze).
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/HPST_Analyza_anorganickych_aniontu_pomoci_HILIC_chromatografie_a_Agilent_LCMSD_i_Q_detektoru_94c23e6710/HPST-Analyza-anorganickych-aniontu-pomoci-HILIC-chromatografie-a-Agilent-LCMSD-iQ-detektoru.jpg" alt="HPST: Hmotnostní detektor Agilent LC/MSD iQ"/>
Tato práce vychází z <a href="https://lcms.cz/library?mainauthorItems=10&amp;search=Analysis+of+Metals%2C+Halides%2C+and+Inorganic+Ions+Using+Hydrophilic+Interaction+Chromatography">dříve publikované aplikace</a>, kde byly anorganické anionty a kationty simultánně analyzovány pomocí systému <a href="https://lcms.cz/products/155">Agilent 1260 Infinity LC</a> s ELSD detekcí, poskytující vynikající tvar píku a minimální sekundární interakce pro anorganické anionty.
Hmotnostní detektor InfinityLab LC/MSD iQ byl použit kvůli zvýšené selektivitě a citlivosti oproti ELSD. Protože mobilní fáze a její přísady silně ovlivňují odezvu detektoru, bylo složení mobilní fáze podrobně prozkoumáno. V HILIC separacích, zvyšující se koncentrace pufru snižuje retenční čas a poskytuje lepší tvar píku. Jelikož je ale odezva hmotnostního spektrometru a tím i citlivost analýzy také ovlivněna koncentrací pufru, vyžaduje analýza nalezení celkové rovnováhy podmínek separace.
<blockquote>
Kompletní aplikaci <a href="https://lcms.cz/library?search=Analysis+of+Inorganic+Anions+Using+HILIC+Chromatography+and+the+Agilent+InfinityLab+LC%2FMSD+iQ+Mass+Selective+Detector">Analysis of Inorganic Anions Using HILIC Chromatography and the Agilent InfinityLab LC/MSD iQ Mass Selective Detector</a> naleznete ke stažení v knihovně LabRulezLCMS.
</blockquote>
<h3>Instrumentace</h3>
<ul>
<li><a href="https://lcms.cz/products/154">Agilent 1290 Infinity II</a> (G7120A)</li>
<li>Agilent 1290 Infinity II vialsampler (G7129B) s integrovaným kolonovým termostatem a 3 μL výměníkem a, 40 μL analytickou hlavou a 20 μL smyčkou (výchozí nastavení) a volitelným termostatem vzorku</li>
<li><a href="https://lcms.cz/products/162">Agilent InfinityLab LC/MSD iQ</a> (G6160A)</li>
</ul>
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/HPST_Agilent_Informace_o_analyzovanych_anorganickych_iontech_699f2555a4/HPST-Agilent-Informace-o-analyzovanych-anorganickych-iontech.jpg" alt="HPST/Agilent: Informace o analyzovaných anorganických iontech"/>
<h5>Parametry metody Agilent 1290 Infinity II LC</h5>
<ul>
<li>Kolona: Agilent InfinityLab <a href="https://lcms.cz/library?mainauthorItems=10&amp;search=Poroshell+120+HILIC-Z">Poroshell 120 HILIC-Z</a>, 2,1 × 100 mm, 2,7 μm při 30 ° C (p/n 685775-924)</li>
<li>Mobilní fáze A: 5 mM mravenčan amonný ve vodě</li>
<li>Mobilní fáze B: acetonitril</li>
<li>Průtok: 0,4 ml/min</li>
<li>Objem nástřiku: 1 μL</li>
</ul>
<h5>Parametry Agilent InfinityLab LC/MSD iQ</h5>
<ul>
<li>Iontový zdroj: ESI</li>
<li>Polarita a typ skenování: Negativní ionizace a sken + SIM (doba prodlevy: 43 ms)</li>
<li>Režim akvizice: Advanced Acquire Mode</li>
<li>Rozsah skenování: m/z 10 až 150</li>
</ul>
<h3>Výsledky</h3>
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/HPST_Agilent_Prekryte_SIM_EIC_chromatogramy_cilenych_aniontu_pri_5_mg_g_47e3b09e7c/HPST-Agilent-Prekryte-SIM-EIC-chromatogramy-cilenych-aniontu-pri-5-mg-g.jpg" alt="HPST/Agilent: Překryté SIM EIC chromatogramy cílených aniontů při 5 μg/g: chlorid (m/z 35), bromid (m/z 79), dusitan (m/z 46), dusičnan (m/z 62), jodid (m/z) 127) a hexafluorfosfát (m/z 145)"/>
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/HPST_Agilent_Porovnani_ruznych_mobilnich_fazi_pouzivanych_pro_detekci_anorganickych_aniontu_Zde_jsou_ukazany_vysledky_pro_chloridovy_ion_SIM_pri_mz_35_36c2e6c845/HPST-Agilent-Porovnani-ruznych-mobilnich-fazi-pouzivanych-pro-detekci-anorganickych-aniontu.-Zde-jsou-ukazany-vysledky-pro-chloridovy-ion-(SIM-pri-mz-35)..jpg" alt="HPST/Agilent: Porovnání různých mobilních fází používaných při analýze anorganických aniontů. Zde jsou ukázány výsledky pro chloridový ion (SIM při m/z 35)"/>

Analýza anorganických aniontů pomocí HILIC chromatografie a Agilent LC/MSD iQ detektoru

Stále více se rozvíjející biofarmaceutický průmysl vyžaduje nové specializované nástroje pro analýzu velkých biomolekul v biologických vzorcích, analýzu monoklonálních protilátek (mAb) nebo také proteinů. Standardní <a href="https://lcms.cz/article/874">kapalinový chromatograf</a> je pro tento typ analýz zcela nevhodný. Pro zajištění integrity Vašich biomolekul potřebujete kapalinový chromatograf s nekovovými komponenty v dráze toku vzorku, čímž se minimalizujete nežádoucí povrchové interakce.
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/HPST_Agilent_Bio_LC_portfolio_1260_Infinity_II_Bio_1290_Infinity_II_Bio_e5f102edac/HPST-Agilent-Bio-LC-portfolio-1260-Infinity-II-Bio-1290-Infinity-II-Bio.jpg" alt="HPST: Agilent Bio-LC portfolio 1260 Infinity II Bio - 1290 Infinity II Bio"/>
Firma Agilent za posledních 12 měsíců výrazně rozšířila své stávající portfolio a nově nabízí 3 verze Bio kapalinových chromatografů (Bio-HPLC), které pokrývají tlakový rozsah od 600 až do 1300barů. Společně s novou generací chromatografických kolon Vám firma Agilent nabídne kompletní řešení Vašich bioseparací. V této prezentaci se dozvíte o všech Bio-LC systémech, které má Agilent v portfoliu.
<blockquote>
Přednášející: Ing. Jan Kovář (Produktová specialistka HPST, s.r.o. pro oblast HPLC)
</blockquote>
<h3><a href="https://lcms.cz/products?category=39&amp;manufacturerItems=10&amp;search=bio">Agilent 1260 Infinity II Bio-inertní HPLC System</a></h3>
Spolehlivost a robustnost. Pojmy, které jsou již více jak 40 let úzce spojeny s kapalinovými chromatografy firmy Agilent Technologies. Bio-inertní provedení systému má především tyto vlastnosti:
<ul>
<li>Žádné kovy v dráze toku mobilní fáze</li>
<li>pH rozsah 1 - 13 (krátce 14)</li>
<li>2 M soli, 8 M močovina</li>
<li>Speciál bio-inertní kapiláry</li>
<li>Tlaková odolnost od 600 Bar a ve variantě 1290 Infinity II Bio LC až do 1 300 Bar</li>
<li>Odolný vůči korozi</li>
</ul>
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/HPST_Agilent_1260_Infinity_II_Bio_inertni_HPLC_System_cc2e054ac1/HPST-Agilent-1260-Infinity-II-Bio-inertni-HPLC-System.jpg" alt="HPST: Agilent 1260 Infinity II Bio-inertní HPLC System"/>
<h4><a href="https://lcms.cz/library?instrumentationItems=27&amp;mainauthorItems=10&amp;search=bio&amp;publicationTypeItems=1-2-7-4">Knihovna Bio-HPLC řešení Agilent</a></h4>
<ul>
<li>Seamless Method Transfer from an Agilent 1260 Infinity Bio-inert LC to an Agilent 1260 Infinity II Bio-inert LC (Aplikace | 2016)
</li>
<li>Performance Comparison to Determine LC Method Compatibility (Aplikace | 2021)
</li>
<li>Performance Characteristics of the Agilent 1260 Infinity II Bio-Inert LC (Technické články | 2017)
</li>
<li>mAb Titer Determination in 60 Seconds Using the Agilent Bio‑Monolith rProtein A Column (Aplikace | 2021)
</li>
<li>Convenient and Reliable Analysis of Antibody Drug Conjugates (Aplikace | 2021)
</li>
<li>Robust, Reliable, Recombinant Protein A Monolith Column for Antibody Titer Determination (Aplikace | 2021)
</li>
<li>Rapid Analysis of Adenovirus Type 5 Particles with Bio-Monolith Anion‑Exchange HPLC Columns to Support the Development of a High‑Titre Manufacturing Platform (Aplikace | 2021)
</li>
<li>Agilent Instrument Control Framework and Agilent 1260 Infinity Bio-inert Quaternary LC with Thermo Fisher Chromeleon (Technické články | 2014)
</li>
<li>Determination of Low-Metal Release Using the Agilent 1260 Infinity II Bio‑inert LC with ICP-MS (Technické články | 2017)
</li>
<li>Detailed Aggregation Characterization of Monoclonal Antibodies Using the Agilent 1260 Infinity Multi-Detector Bio-SEC Solution with Advanced Light Scattering Detection (Aplikace | 2016)
</li>
</ul>
<h3>Webináře</h3>
<h5><a href="https://lcms.cz/webinar/1124">1. Protein A Affinity Capture followed By AdvanceBio SEC Aggregation Analysis using the Agilent InfinityLab Series 2D-LC System</a> (ZÁZNAM | Proběhlo St, 29.9.2021)</h5>
Proteinová biofarmaceutika, jako jsou rekombinantní monoklonální protilátky, jsou v současné době široce používána k léčbě různých život ohrožujících chorob, včetně rakoviny a autoimunitních onemocnění. 
<h5><a href="https://lcms.cz/webinar/832">2. Bio-Separation Workflow Solutions</a> (ZÁZNAM | Proběhlo Út, 23.3.2021)</h5>
Tento webinář se zaměří: Řešení pro Bio &amp; non-Bio aplikace; Chromatografické kolony pro urychlení charakterizace; Biofarmakologické aplikace využívající Agilent UHPLC a LC Q-TOF.
<h5><a href="https://lcms.cz/webinar/694">3. Resolve More Isoforms with the New Agilent 1290 Infinity II Bio LC System</a> (ZÁZNAM | Proběhlo St, 28.4.2021)</h5>
Připojte se k LC aplikačnímu specialistovi a projděte si s ním nové systémy Agilent Technologies 1290 Infinity II Bio LC a zvolte optimální chromatografický systém pro vaše potřeby.
<h5><a href="https://lcms.cz/webinar/627">4. Next Generation Bio LC Solutions: Workflow solutions with the new 1290 Infinity II Bio LC System with High-Speed Pump</a> (ZÁZNAM | Proběhlo Čt, 10.12.2020)</h5>
Zveme vás, abyste se připojili k našemu webináři, kde se podíváme na nový systém Agilent Technologies 1290 Infinity II Bio používaný při analýzách biofarmak.
<h5><a href="https://lcms.cz/webinar/1562">5. Bio Compatible 2D-LC with OpenLab CDS</a> (St, 30.3.2022, 19:00 (CET - Prague))</h5>
Tato prezentace ukáže 2D-LC software pro OpenLab CDS, který podporuje všechny klíčové pracovní postupy 2D-LC; kvalitativní a kvantitativní měření, detekce UV a MSD, heart-cutting a mnoho dalšího. 
<h5><a href="https://lcms.cz/webinar/742">6. Biocompatible 1290 Infinity II Bio LC for your most complex Biopharma needs</a> (ZÁZNAM | Proběhlo St, 17.2.2021)</h5>
Na tomto webináři budou řečníci diskutovat o současných výzvách, kterým analytické laboratoře čelí při analýze biologických látek a jak lze překonat překážky integrity vzorku a povrchové interakce.

Agilent Bio-LC portfolio (záznám přednášky)

Pro separaci se využívá distribuce látek mezi dvě fáze, mobilní/pohyblivou a stacionární/nepohyblivou.
<h5>Z hlediska fyzikálně-chemického principu dělení můžeme kapalinovu chromatografii rozdělit na:</h5>
<ul>
<li>adsorpční chromatografii - k separaci dochází v důsledku specifických interakcí látek se stacionární fází tvořenou pevnými, nemodifikovanými částicemi</li>
<li>rozdělovací chromatografii - látky jsou zachytávány v kapalné stacionární fázi, která je nanesená na pevném nosiči</li>
<li><a href="https://lcms.cz/library?mainauthorItems=10&amp;search=ion+exchange">iontově-výměnnou chromatografii</a> - slouží k separaci iontů na stacionární fázi, kterým je nosič s navázanými nabitými funkčními skupinami</li>
<li><a href="https://lcms.cz/library?instrumentationItems=42&amp;mainauthorItems=10&amp;search=GPC">gelovou (permeační) chromatografii</a> - kdy dochází k dělení látek na základě velikosti částic, které se zachytávájí ve stacionární fázi tvořené gelem s jasně definovanou velikostí pórů</li>
<li><a href="https://lcms.cz/library?mainauthorItems=10&amp;search=affinity+chromatography">afinitní chromatografii</a> – která umožňuje oddělení příbuzných proteinů z komplexní směsi, na základě interakce s nosičem s imobilizovanými ligandy</li>
<li>speciální chromatografie – <a href="https://lcms.cz/library?mainauthorItems=10&amp;search=chiral">chirální</a> aj.</li>
</ul>
<blockquote>
<h4>+ 20 zdarma dostupných webinářů Agilent Technologies na téma <a href="https://lcms.cz/webinars?search=agilent&amp;tags=36-24">akademie a principy HPLC</a> v databázi</h4>
</blockquote>
<blockquote>
<h5>School Series of LC Basic Chapter</h5>
</blockquote>
<blockquote>
<ul>
<li>Pochopení nuancí HPLC kolon</li>
<li><a href="https://lcms.cz/library?instrumentationItems=34&amp;mainauthorItems=10&amp;search=selection">Výběr správné chemie kolony</a></li>
<li>Pochopení dopadu stacionární fáze kolony na selektivitu</li>
<li>Jak zvýšit produktivitu vaší laboratoře</li>
<li>Základní <a href="https://lcms.cz/library?mainauthorItems=10&amp;search=fundamentals">teorie a principy HPLC chromatografů</a></li>
<li>Typy hardwaru (čerpadla, autosamplery, termostaty kolon a detektory)</li>
<li><a href="https://lcms.cz/library?mainauthorItems=10&amp;search=troubleshooting">Tipy a triky pro odstraňování problémů</a> souvisejících s hardwarem</li>
</ul>
</blockquote>
<blockquote>
<h5>School Series of LC Advanced Chapter</h5>
</blockquote>
<blockquote>
<ul>
<li>Současné <a href="https://lcms.cz/library?mainauthorItems=10&amp;search=method+developement">trendy ve vývoji HPLC metod</a></li>
<li>Systematické přístupy</li>
<li>Jak začít s vývojem HPLC metody</li>
<li>Služby pro celou laboratoř</li>
<li>Pokročilé tipy a triky pro odstraňování problémů</li>
<li>Vliv parametrů pokročilých metod v HPLC</li>
<li>Klíčové unikátní vlastnosti UHPLC systémů</li>
</ul>
</blockquote>
<h5>Obecně se kapalinový chromatograf skládá z:</h5>
<ul>
<li>vysokotlakého čerpadla (pumpy) – slouží k transportu mobilní fáze</li>
<li>zařízení pro dávkování vzorku – automatické nebo manuální</li>
<li>chromatografické kolony (stacionární fáze) – ta může být v termostatovaném prostoru</li>
<li>detektoru - zaznamenává signál, který je dán rozdílem mezi průchodem čisté mobilní fáze a mobilní fází obsahující eluovanou složku (vzorek)</li>
<li>také může obsahovat řadu obměn – další detektor i pumpu, frakční kolektor, soustavu ventilů apod.</li>
</ul>
Smyslem tohoto článku je pak vysvětlit tok mobilní fáze systémem HPLC na jedné z nejčastěji používaných sestav Agilent Technologies. 
Na Obrázku 1 můžete vidět schéma, kde mobilní fáze prochází kvartérní pumpou, jejíž součástí je degasser pro její odplynění a která umožňuje míchání až čtyř různých rozpouštědel. K tomuto nízkotlakému míchání dochází ve směšovacím ventilu (<a href="https://lcms.cz/library?mainauthorItems=10&amp;search=MCGV">MCGV</a> - multi channel gradient valve), následně pak mobilní fáze proudí do vstupního ventilu před prvním pístem pumpy.
Tento ventil může být řízen elektronicky (AIV - active inlet valve) a nebo pohybem pístu (PIV – passive inlet valve). Prvním pístem je pak mobilní fáze tlačena do výstupního ventilu (outlet valve) a na tlumič rázů (damper), jehož součástí je i tlakový senzor. Přes druhý píst proudí mobilní fáze do promývacího ventilu (purge valve), který ji pouští buď do odpadu a promývá se pouze pumpa a nebo dál do zbytku sestavy. 
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/HPST_Obrazek_1_Schema_toku_mobilni_faze_kapalinovym_chromatografem_s_UV_detekci_f7d6bf31a4/HPST-Obrazek-1-Schema-toku-mobilni-faze-kapalinovym-chromatografem-s-UV-detekci.jpg" alt="HPST: Obrázek 1 Schéma toku mobilní fáze kapalinovým chromatografem s UV detekcí"/>
Pokud je promývací ventil zavřený, jde mobilní fáze kapilárou do dávkovacího ventilu autosampleru. Nedochází-li v dané chvíli k nástřiku vzorku, proudí tato fáze skrz dávkovací zařízení, smyčku, jehlu a sedýlko zpět do dávkovacího ventilu. To je hlavní výhoda automatických samplerů firmy Agilent Technologies, že vnitřní části, potřebné pro nadávkování vzorku, jsou neustále promývány mobilní fází a tím se snižuje možnost přenosu analytů z jednoho vzorku do druhého. 
Z autosampleru proudí mobilní fáze na chromatografickou kolonu, kde po nadávkování vzorku dochází k separaci jednotlivých složek vzorku, které jsou dále unášeny do detektoru diodového pole (DAD). 
Detekce těchto složek v DAD je pak dána absorbancí paprsku světla konkrétní vlnové délky při průchodu analytickou celou, kterou také prochází mobilní fáze.
V <a href="https://lcms.cz/products?category=8&amp;distributorItems=37&amp;manufacturerItems=10">chromatografickém softwaru</a> pak můžeme rozdíl mezi absorbancí čisté mobilní fáze a absorbancí mobilní fáze s odseparovanou složkou vzorku pozorovat jako chromatogram. Z cely detektoru odchází mobilní fáze do odpadu, případně do frakčního kolektoru či dalšího detektoru.
Správné pochopení toku mobilní fáze pak může uživatelům usnadnit diagnostiku problému, který se může projevit nestandardněm vysokým nebo naopak nízkým zpětným tlakem v HPLC systému. Tento tlak je kontinuálně monitorován tlakovým senzorem a může být sledován v chromatografickém softwaru.
Příští díl servisního okénka HPLC by měl být věnován jednotlivým typům HPLC/UHPLC pump, které na náš trh dodává společnost Agilent Technologies.
<h3>Přehled literatury k základům a principům v kapalinové chromatografii od Agilent Technologies (<a href="https://lcms.cz/library?search=fundamentals&amp;mainauthorItems=10">ke stažení v knihovně LabRulezLCMS</a>)</h3>
<ul>
<li>HPLC Separation Fundamentals - LC Columns and Consumables (Prezentace | 2007)
</li>
<li>HPLC Troubleshooting Fundamentals (Prezentace | 2021)
</li>
<li>Mass Spectrometry Fundamentals –Theory (Prezentace | 2016)
</li>
<li>SAMPLE PREPARATION FUNDAMENTALS FOR CHROMATOGRAPHY (Příručky | 2013)
</li>
<li>Eliminate your Application and Chromatography Challenges - Optimizing your Application/Method Transfer considerations (Prezentace | 2020)
</li>
<li>Eliminate your Application and Chromatography Challenges - Troubleshooting your Method, Application/Chromatography (Prezentace | 2020)
</li>
<li>Is 2D HPLC the Answer for You (Prezentace | 2021)
</li>
<li>Demystifying the Chromatographic Process (Prezentace | 2014)
</li>
<li>HPLC Method Development Systematic Approach vs Random Walk - Improving the Efficiency of Method Development and Optimization (Prezentace | 2014)
</li>
<li>Can I Really Enjoy the Benefits of the Latest LC Column Technology? (Prezentace | 2016)
</li>
</ul>

TEORIE, PRAXE A ÚDRŽBA: HPLC – Vysokoúčinná kapalinová chromatografie – základy a principy

Webináře

Aplikace

Akademie

Osobnosti

Plasty

Životní prostředí

Potraviny

Vody

Zdraví

Přednáška

Vědecký článek

Rozhovor

Toxikologie

Popularizace

Věda a výzkum

Software

Covid-19

Kariéra

Článek

Laboratoře

Různé

Produkt

Video

Poster

Nejbližší akce

Typ novinky

Zaměření

Je autorizovaným distributorem společnosti Agilent Technologies pro Českou republiku v oblastech chromatografie (GC, HPLC, UHPLC, kapilární elektroforéza) a hmotnostní spektrometrie (GC/MS, LC/MS, CE/MS), disolučních aparátů, molekulární (UV-Vis, UV-Vis-NIR, fluorescence, FTIR analyzátory a mikroskopy) a atomové spektroskopie (ICP-OES, ICP-MS, AAS), a v neposlední řadě také v oblasti molekulární biologie a genomiky (analýza nukleových kyselin a proteinů, microarray skenery a skla, PCR & RT-PCR, qPCR, řešení pro NGS, reagencie pro mutagenezi a klonování, sondy FISH a další).

Altium International

Shimadzu at ISC 2026

DataApex at ISC 2026

Waters at ISC 2026

Managing 4D-STEM data with smarter acquisition

Spatial Proteomics for Translational Research

Streamlining Endotoxin Testing: Automated Sample Preparation and Audit-Ready Workflows for QC Laboratories